[发明专利]一种改良去细胞组织工程瓣膜/血管支架的方法

权利要求书

1.一种改良去细胞组织工程瓣膜/血管支架的方法，其特征在于，包括下列步骤：

1）去细胞组织工程瓣膜/血管支架制作：

选取新鲜家猪完整主动脉瓣，热缺血时间小于2小时，浸入存4℃ PBS液中保存，剔除血管外膜、附着的脂肪及肌肉部分，瓣根血管长4 .0cm±0.5cm，血管外径1.2 cm±0.01 cm，保留完整的主动脉瓣叶，避免损伤；修剪完毕后，经无菌10mM PBS液漂洗2~3次后，装入广口瓶中，瓣膜置于含10g/L胰蛋白酶+0.02%EDTA及青霉素和链霉素的PBS液中，24℃，持续振荡消化24h，期间每12h换上述溶液一次；继而换用含1％TritonX-100及青霉素和链霉素的高渗液，24℃下持续振荡洗涤24h，期间每12h换液一次，必要时重复一次；脱细胞、去垢完成后，用无菌含青霉素和链霉素的PBS液振荡洗涤24h，期间每6h换液一次，以清除残留的细胞碎片和DNA、RNA片段；振荡洗涤完毕后，置于灭菌广口瓶中，封口后送钴源室辐照消毒备用；

2）制备线型YGRGDSP肽序列：

以多肽合成仪制备线型YGRGDSP序列，并于多肽链-NH₂末端氨基酸应用丹磺酰氯标记，并进行荧光显色测定；

3）使用磷酸盐缓冲液配制2%环氧氯丙烷，加入YGRGDSP多肽制成多肽液，使多肽液中的YGRGDSP多肽的终浓度为2.0mg/ml；

4）将去细胞组织工程瓣膜/血管支架置入多肽液交联反应12小时，使YGRGDSP多肽连接于去细胞组织工程瓣膜/血管支架的胶原和弹性蛋白上。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的钴源室辐照消毒时间为12小时~14小时。