[发明专利]木聚糖酶酶活检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及饲料用酶酶活检测方法，尤其涉及木聚糖酶分解小麦效率的检测方法。

背景技术

近年来，小麦作为一种饲料原料在饲料业大规模应用。但是，小麦含有一定量的抗营养因子——木聚糖，它影响营养成份的充分消化和吸收，增加动物肠道的粘度，造成饲料利用效率降低，从而导致动物营养不良、污染环境等影响畜牧业发展的一系列后果。在动物饲料中添加木聚糖酶降解木聚糖，从而消除木聚糖对小麦型高粘度饲料的影响已取得显著的成效，然而，如何检测木聚糖酶分解小麦的效率，国内并没有统一的标准，检测方法不同，导致取得的结论不一致，从而影响了木聚糖酶及其相关产品的推广和应用，也影响了小麦型高粘度饲料在饲料业中的大量推广和应用。

目前，常用的检测木聚糖酶活力的方法，大都采用木燕麦做底物来测定酶制剂产品的酶活，但这种方法取得的结果与实际应用效果间存在很大的差异，在实际应用中，效果很不理想。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种木聚糖酶分解小麦效率的的检测方法，该方法使用粉碎的小麦作为木聚糖酶水解的底物，相较木燕麦做底物，更接近实际应用，有准确的指导意义。

本发明的技术方案是：木聚糖酶分解小麦效率的检测方法，先采用常规方法绘制木糖含量标准曲线，具体步骤如下：分别取1mg/ml标准木糖溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于6个洁净的试管中，补加蒸馏水至2.0ml，加入2.0ml DNS试剂，摇匀，沸水浴10min，冷却后用移液管加蒸馏水10ml；用10mm比色皿，用分光光度计分别测定其吸光度(OD值)。所述木聚糖酶分解小麦效率的检测方法，包括以下步骤：

(1)底物制备：取小麦去壳粉碎，得小麦粉；

(2)待测反应液的制备：称取数份等质量，计为C克的小麦粉，分别加入等量的蒸馏水中，搅匀，制得计为D毫升小麦粉溶液；依次向上述小麦粉溶液中添加木聚糖酶，木聚糖酶添加量从零单位开始，依次增加，制得数份反应液；

(3)比色测定：将步骤(2)中的数份反应液均置于40℃恒温水浴锅中，在一段时间后分别取各份反应液中的反应液B毫升，0.05≤B≤D，均加入9倍于B的pH5.3的醋酸钠-醋酸缓冲液和10倍于B的3，5-二硝基水杨酸试剂混合均匀，沸水浴反应10分钟后，冷却，再均加入50倍于B的蒸馏水，以没加木聚糖酶的反应液作为空白对照，用分光光度计测定各反应液的分光度；

(4)计算结果：根据所测得的分光度及木糖含量标准曲线，求得各份反应液的B毫升反应液所含有的还原糖量，用下列公式计算各份反应液中的木聚糖酶分解单位质量小麦粉所得还原糖量，

an=An×DB×C]]>

其中：n为0，1，2，3，…

a_n表示第n份反应液中的木聚糖酶分解单位质量小麦粉生成的还原糖量，单位mg/g；

A_n表示第n份反应液的B毫升反应液所含有的还原糖量，单位mg；

D表示反应液总体积，单位ml；

B表示比色测定时所取的反应液体积，单位ml；

C表示各份反应液所用小麦粉的质量，单位g。

所述小麦粉过60目筛。

所述D取6，所述B取0.2。

所述步骤(3)中的一段时间为至少1小时。

所述步骤(3)中取反应液的时间分为1小时，2小时，3小时三次吸取。

本发明的有益效果为，用木燕麦做底物检测木聚糖酶酶活是标准方法，然而，在实际应用中，尤其是在用小麦粉作为饲料时，用小麦粉做底物检测木聚糖酶酶活，测得的结果更跟接近实际，有较准确的指导意义。

附图说明

图1.木糖含量标准曲线。

图2.依表3不同单位木聚糖酶分解单位质量小麦粉所得还原糖量数据，作出的分解时间—所得还原糖含量曲线图。

具体实施方式

以下将结合具体实施过程，对本发明做进一步详细说明。