[发明专利]一种腔上囊活性多肽提取物、其提取方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说是一种活性多肽及其提取方法和用途。

背景技术

腔上囊是鸟纲类动物体液免疫系统B淋巴细胞分化成熟的中枢器官，位于泄殖腔背侧的囊状结构，由于被意大利解剖学家H.法布里奇乌斯发现，又称法氏囊，是鸟类特有的结构。

腔上囊是鸟类最早发生并提供B淋巴细胞的器官。迁入的淋巴干细胞在其中向抗体生成细胞分化，包括由淋巴干细胞分化为前B淋巴细胞、进而分化出现IgM生成细胞、再分化出现IgG生成细胞等，尤其是从IgM生成细胞向IgG生成细胞的转化必须依赖腔上囊的微环境，一旦腔上囊淋巴细胞迁出，外周体液免疫功能建立，腔上囊切除对体液免疫反应的影响就会减弱乃至消失；另一方面，腔上囊连滤泡上皮具有内吞功能，并且通过腔上囊途径给予抗原，可以使鸟类获得对特异抗原的免疫能力，这表明腔上囊同时具有外周淋巴器官的功能；此外，腔上囊还产生促进B淋巴细胞分化为成熟的激素物质：腔上囊因子或腔上囊素。

鸡腔上囊是鸡的一个泄殖腔的淋巴样器官，对B淋巴细胞性免疫球蛋白形成的成熟方面起重要作用，有人认为在哺乳动物胃肠道中丰富的淋巴组织可能具有腔上囊的同样功能。鸡腔上囊提供的B淋巴细胞，产生抵制微生物(如肺炎球菌、脑膜炎球菌，双球菌、链球菌、淋球菌等)抗体，以防御霉菌、寄生虫，病毒、分支杆菌和癌转移等作用，这一器官伴随着鸡的生长发育而增大，到鸡成熟后慢慢萎缩变小，可见它直接与鸡的免疫功能有关。目前国内外研究人员利用牛、猪、兔、鸭等动物的脾细胞、淋巴细胞、周血淋巴细胞制备转移因子，起到了特异性及非特异性地增强细胞介导免疫功能的作用，也有利用胸腺制备胸腺肽，均收到了满意的结果，但是从古到今鸡腔上囊都被人们作为废物丢弃。

发明内容

本发明的目的在于提供一种腔上囊活性多肽提取物。该产品抗病毒活性高，水溶性好，生产成本低。

本发明的另一目的在于提供一种腔上囊活性多肽提取物的提取方法。

本发明的再一目的在于提供腔上囊活性多肽提取物在制备增强机体的细胞免疫功能、防病抗病和抑制肿瘤生长药物中的应用。

本发明所述的腔上囊活性多肽提取物从鸡腔上囊中提取，含9个肽段，分子量小于10000道尔顿。

其中优选的活性多肽分子量小于6000道尔顿。

本发明所述的腔上囊活性多肽的提取方法，包括下述步骤：

鸡腔上囊的采集：选取青年期健康鸡的腔上囊；

将鸡腔上囊用pH为7～7.5的PBS洗净，切除外层脂肪及其它杂质；

将经过上述处理的鸡腔上囊置于匀浆器中，加入生理盐水匀浆成浆液；

将浆液装于无菌瓶中，置-17～-23℃冰箱中冷冻，待完全冻结后，取出置室温中融化后，再重新置-17～-23℃冰箱中冷冻，然后取出置室温中融化，反复冻融；

将冻融后的腔上囊浆液置离心机中离心，取上清液，过滤；

在过滤后得到的物质中加入透析用水，再加入分析纯的氯化钠，摇匀，采用细菌过滤器过滤，得鸡腔上囊活性多肽提取物，装入无菌的安瓶中。

作为本发明一种优选方案，将匀浆液反复冻融7～12次。

作为本发明的进一步优选方案，将匀浆液反复冻融10次。

作为本发明的另一种优选方案，所述离心过程中离心机的转速为3000～4000rpm。

作为本发明的再一种优选方案，在所述抽滤后的物质中加入透析用水，再加入0.85％的分析纯氯化钠。

对上清液进行过滤时，可采用截留分子量为10000道尔顿的滤膜进行抽滤，实现对腔上囊活性多肽分子量的控制，当然，为了进一步获取所需分子量的腔上囊活性多肽提取物，可选用不同的滤膜进行抽滤；进行第二次过滤时可采用细胞滤膜进行抽滤，将活性多肽提取物进一步净化。

本发明研究人员经过大量的实验研究发现，本发明所述的腔上囊活性多肽提取物对B淋巴细胞性免疫球蛋白的形成起重要作用，而且对T细胞也有一定的激发作用，使T细胞缺损的裸小鼠的细胞免疫有所增强；具有提高整个免疫系统的免疫功能，包括细胞免疫、体液免疫、单核细胞及巨噬细胞吞噬功能，从而达到抑制肿瘤生长的作用，从整体上促使机体免疫反应向有利的方向转化。

本发明所述腔上囊活性提取物可以经过后处理制成各种剂型，如口服液、注射剂、胶囊剂等、片剂、干粉针剂等，优选为口服液和注射剂。

优选20ml口服液和5ml注射剂，所述口服液每毫升中含多肽不少于1.8mg，所述注射剂每毫升中含多肽0.9mg。