[发明专利]饲料工业专用的外源性复合酶制剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.饲料工业专用的外源性复合酶制剂，其特征在于，包含木聚糖酶，β-甘露聚糖酶，纤维素酶，β-葡聚糖酶，果胶酶等五种水溶性非淀粉多糖酶(SNSP酶)，并同时含有植酸酶；该外源性复合酶制剂包含固态型或液态型两种剂型。

2.根据权利要求1所述的饲料工业专用的外源性复合酶制剂，其特征在于，当添加量为200g/吨饲料时，固态型外源性复合酶制剂中各酶酶活性为：3800U/g≤木聚糖酶活性≤5700U/g，1800U/g≤β-甘露聚糖酶活性≤2500U/g，1900U/g≤纤维素酶活性≤2600U/g，1200U/g≤β-葡聚糖酶活性≤2050U/g，2450U/g≤果胶酶活性≤2920U/g，2250U/g≤植酸酶活性≤2650U/g。

3.根据权利要求1所述的饲料工业专用的外源性复合酶制剂，其特征在于，当添加量为150ml/吨饲料时，液态型外源性复合酶制剂中各酶活性为：5060U/ml≤木聚糖酶活性≤7600U/ml，2400U/ml≤β-甘露聚糖酶活性≤3350U/ml，2550U/ml≤纤维素酶活性≤3480U/ml，1600U/ml≤β-葡聚糖酶活性≤2750U/ml，3260U/ml≤果胶酶活性≤3890U/ml，3000U/ml≤植酸酶活性≤3530U/ml。

4.根据权利要求2或3所述的饲料工业专用的外源性复合酶制剂，其特征在于，所述的木聚糖酶，β-甘露聚糖酶，纤维素酶，β-葡聚糖酶，果胶酶等五种水溶性非淀粉多糖酶各酶活性之和与植酸酶活性之间的最佳活性比是5.5∶1。

5.饲料工业专用的外源性复合酶制剂的制备方法，其特征在于，该方法包括：

(1)五种水溶性非淀粉多糖酶的制备，包括木聚糖酶的制备，β-甘露聚糖酶的制备，纤维素酶的制备，β-葡聚糖酶的制备，果胶酶的制备；

(2)植酸酶的制备；

(3)将制备得到的五种水溶性非淀粉多糖酶与植酸酶按比例组合，得到饲料工业专用的外源性复合酶制剂。

6.根据权利要求5所述的饲料工业专用的外源性复合酶制剂的制备方法，其特征在于，所述的木聚糖酶的制备包括以下工艺步骤：

(1)发酵培养

a.菌种与培养基

菌种黑曲霉斜面培养基(PDA)：马铃薯400g、葡萄糖20g、琼脂18g、水1000ml，液体种子培养基：葡萄糖50g、蛋白胨0.20g、(NH₄)₂HPO₄0.56g、KH₂PO₄0.144g、MgSO₄·7H₂O0.12g、啤酒45ml、蒸馏水1000ml，发酵培养基培养为：玉米芯5％，K₂HPO₄0.2％，豆粕2％，麸皮93％，水含量60％；

b.菌种培养

挑取PDA斜面培养基上单菌落于液体种子培养基，200r/min，摇瓶培养，温度28℃，时间24h，孢子数大于109/ml；

c.发酵培养

按8％接种量将种子培养液接种于发酵培养基上，充分搅拌混匀，温度30℃，12小时翻曲一次，培养64h；测湿曲酶活可达15000U/g以上；木聚糖酶活性测定参照DNS法，于2.4mL0.5％桦木木聚糖溶液(pH4.6柠檬酸2Na₂HPO₄缓冲液配制)中加入0.1mL适当稀释的酶液，50℃准确反应15min，立即加入2.5mlDNS试剂终止反应，沸水浴7min显色，迅速冷却后加水5mL混匀，于540nm比色；每分钟产生相当于1μmol还原糖(以木糖计)的酶量定义为1个酶活性单位(IU)；

(2)酶的提取

酶的分离纯化除特别注明外，所有纯化过程均在10℃以下进行，所用缓冲液均为pH7.5，0.02mol/L的Na₂HPO₄NaH₂PO₄缓冲溶液；取一定量的固态发酵曲，用6倍体积缓冲液40℃振荡浸提30min，过滤收集第1次滤液，得粗酶液，于粗酶液中添加硫酸铵至65％饱和度，4℃静置过夜，离心(4℃，10000r/min，15min)，弃上清液；沉淀用少量缓冲液溶解，测酶活，根据酶活检测结果，选择进行浓缩或稀释，用于配制复合酶。