[发明专利]从食品样品中简易提取细菌DNA的方法

权利要求书

1.一种从食品样品中提取细菌基因组DNA的方法，其特征在于包含步骤：

1)以含有细菌的食品为样品，过夜培养，离心富集菌体，然后用无菌水充分洗涤，得沉淀物；

2)使用含KCl，Tris-HCl，MgCl₂和蛋白酶K的裂解液重悬步骤1)所得的沉淀物，得重悬液；

3)将步骤2)所得的重悬液进行第一次水浴，裂解细菌细胞，然后再经第二次水浴；

4)将步骤3)的所得物进行离心，获得含所述细菌基因组DNA的中层上清；

5)收集步骤4)的含所述细菌基因组DNA的中层上清，烘干，即制得所述细菌基因组DNA。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1)中样品为婴儿配方奶粉，该婴儿配方奶粉中含有沙门氏菌、志贺氏菌、化脓性链球菌、蜡样芽孢杆菌、产酸克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌、粘质沙雷氏菌、单增李斯特氏菌、阪崎肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、弗氏柠檬酸杆菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、副溶血弧菌中的至少一种致病菌。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2)所述的裂解液包含Triton X-100，NP40或Tween 20中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于步骤2)所述的裂解液包含KCl，Tris-HCl，MgCl₂，Triton X-100，NP40，Tween 20和蛋白酶K。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于步骤2)所述的裂解液包含50mM KCl，10mM Tris-HCl，2.5mM MgCl₂，0.1％的Triton X-100，0.5％NP40，0.5％Tween 20和0.1mg/ml的蛋白酶K。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于步骤2)所述的裂解液中Tris-HCl的pH值为9.0。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤3)中第一次水浴的温度为40～60℃。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于步骤3)中第一次水浴的温度为45～55℃。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于步骤3)中第一次水浴的温度为50℃。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤3)中第一次水浴的时间为0～120分钟。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于步骤3)中第一次水浴的时间为20～100分钟。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于步骤3)中第一次水浴的时间为40～80分钟。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于步骤3)中第一次水浴的时间为60分钟。

14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤3)中第二次水浴的温度为100℃。