[发明专利]一种银杏内酯注射液的质量控制方法

说明书

技术领域

本发明属于中药分析领域，涉及一种中药制剂的高效液相色谱检测方法，特别涉及银杏内酯注射液的高效液相色谱检测方法，本高效液相色谱检测方法有含量测定方法、限量检查方法及指纹图谱测定方法。 

技术背景

银杏内酯是银杏叶(Ginkgo Leaf)中含有的一组具有较强生物活性的萜类化合物，已分离得到的包括银杏内酯(ginkgolide)A，B，C，J，M，K，L和白果内酯(bilobalide)，研究发现它们是很强的血小管活化因子(PAF)拮抗剂，具有较好的应用前景。国外已有BN52063(银杏内酯混合物)和BN52021(银杏内酯B)进入临床实验阶段。 

银杏内酯注射液是以银杏总内酯为原料制成的注射液，主要成分为银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)、银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)、银杏内酯K(C₂₀H₂₂O₁₀)，含有少量银杏内酯C。主要用于治疗缺血性中风。 

内酯类化合物的一个特征是在碱性条件下开环生成盐(羧酸型)；开环化合物在酸性条件下又闭合成为内酯(内酯型)。因此，银杏内酯各成分在注射液中可能同时以两种形式存在。 

目前，未见对银杏内酯注射液中同时测定银杏内酯A，银杏内酯B，银杏内酯K的质量控制方法，本发明提出了能够有效控制银杏内酯注射液质量的方法，包括将注射液调pH到酸性酸化使内酯全部转化为内酯型后，同时测定银杏内酯A，银杏内酯B，银杏内酯K含量的方法，还提出了不经酸化直接对游离银杏内酯A，银杏内酯B，银杏内酯K进行限量检查的方法和指纹图谱测定的方法，本发明提供的方法能够达到更全面、有效地控制银杏内酯注射液制剂质量的目的。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用高效液相色谱法控制银杏内酯注射液质量的方法。本方法具体包含有三种方法，分别为：1、含量测定方法；2、游离银杏内酯限量检查方法；3、指纹图谱测定方法，可以采用以上方法中一种或几种对银杏内酯注射液进行质量控制。 

本发明的目的是通过下列方式实现的： 

(1)含量测定 

①色谱条件为：柱温为20℃～40℃；流动相为异丙醇-甲醇-水比例为5～10：15～25：65～75，流速为0.5ml/min～1.5ml/min，检 测器为可变波长紫外检测器，检测波长为210nm～230nm，理论塔板数按银杏内酯B计应不低于5000； 

②对照品溶液的制备方法为：分别取银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯K对照品，分别加40％～60％丙酮溶解，制成1ml分别含0.2mg～0.8mg银杏内酯A、0.2mg～0.8mg银杏内酯B、0.2mg～0.8mg银杏内酯K的溶液，即得对照品溶液；； 

③供试品溶液的制备方法为：精密量取银杏内酯注射液1ml～5ml置5ml～20ml量瓶中，加入3mol/L～9mol/L的盐酸溶液1ml～5ml，放置使有结晶析出，加丙酮使溶解并稀释至刻度，摇匀，放置，滤过，即得供试品溶液； 

④测定：分别精密吸取等量的对照品溶液与供试品溶液各5μl～50μl，注入液相色谱仪，测定； 

⑤测定结果：银杏内酯注射液每毫升含银杏内酯A为0.5mg～3.0mg、银杏内酯B为1.5mg～4.0mg、银杏内酯K为0.5mg～3.0mg；含银杏内酯以银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯K的总量计，应为3.0mg～6.0mg； 

所述的含量测定方法的优选为： 

①色谱条件为：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温为30℃，流动相为异丙醇-甲醇-水比例为7：21：72，流速：1ml/min，检测波长为220nm，理论塔板数按银杏内酯B计应不低于7000； 

②对照品溶液的制备方法为：分别精密称取经105℃干燥至恒重的银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯K对照品适量，分别加50％丙酮溶解，制成1mL分别含0.5mg银杏内酯A、0.5mg银杏内酯B、0.1mg银杏内酯K的溶液，即得对照品溶液； 

③供试品溶液的制备方法为：精密量取银杏内酯注射液2ml置10ml量瓶中，加入6mol/L的盐酸溶液2ml，室温放置3.5小时使有结晶析出，加丙酮使溶解并稀释至刻度，摇匀，放置30分钟，经微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；