[发明专利]检测水产品食物过敏原基因的实时荧光PCR方法无效
| 申请号： | 200810071732.4 | 申请日： | 2008-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN101434991A | 公开（公告）日： | 2009-05-20 |
| 发明（设计）人： | 刘光明;曹敏杰;蔡慧农 | 申请（专利权）人： | 集美大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 厦门市新华专利商标代理有限公司 | 代理人： | 毛新民 |
| 地址： | 361021福建*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 水产品 食物 过敏原 基因 实时 荧光 pcr 方法 | ||
1、一种检测水产品食物过敏原基因的实时荧光PCR方法，其特征在于：其步骤包括提取样品总RNA，通过SYBR Green或TaqMan探针法实时荧光PCR技术分别检测水产品食物过敏原鱼类小清蛋白(Par)和甲壳类原肌球蛋白(TM)基因，以及内标基因β-actin，依据扩增动力学曲线和Ct值对检样进行结果分析。
2、根据权利要求1所述的检测水产品食物过敏原基因的实时荧光PCR方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
(1)设计合成用于检测水产品食物过敏原的3组引物及探针；
Par基因的上游引物：5’-ATGGCATTCGCTGGAATTCTG-3’，
Par基因的下游引物：5’-TGCCATTTATGCCTTGACCAG-3’，
Par基因的探针：5’-FAM-AGGGCTGCCAAGCTGCTGACTCC-TAMRA-3’；
TM基因的上游引物，TM-1：5’-CGCATGGACGCCATCAAGAAGAAGATG-3’，
TM基因的上游引物：5’-AGGTTAATAGCCAGACAGTTCGCT-3’，
TM基因的探针：5’-FAM-AGCAGCTGTCCGCCGCTAACACTAAG-TAMRA-3’；
actin基因的上游引物：5’-AGAGCAAGAGAGGTATCTTGA-3’，
actin基因的上游引物：5’-GGCGGTCTCGTGGATACCAG-3’，
actin基因的探针：5’-FAM-CACGGCATCATCACTAACTGGGACGA-TAMRA-3’。
(2)实时荧光PCR检测。配制荧光PCR扩增反应体系，体系含有PCR缓冲液、MgCl2、dNTP、逆转录酶、RNase抑制剂、DNA聚合酶、上游引物和下游引物、Oligo dT15、RNA模板、灭菌超纯水；荧光PCR扩增反应条件为45-55℃逆转录20-40min；93-95℃预变性3-10min；93-95℃/30-60S，50-60℃/30-60S，72℃/40-90S，35-45循环；检测设立阳性对照、阴性对照和空白对照；反应结束后，依据荧光PCR仪器的分析软件，求出每个样品的Ct值，依据Ct值和扩增动力学曲线对检样进行分析。
3、根据权利要求1和2所述的检测水产品食物过敏原基因的实时荧光PCR方法，其特征在于：通过SYBR Green或TaqMan探针法实时荧光PCR技术分别检测水产品食物过敏原基因Par和TM。
4、根据权利要求1和2所述的检测水产品食物过敏原基因的实时荧光PCR方法，其特征在于：可以制成用于检测水产品食物过敏原基因的实时荧光PCR试剂盒。
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