[发明专利]利用色素蛋白创造家蚕彩色茧的方法

权利要求书

1、利用色素蛋白创造家蚕彩色茧的方法，其特征在于依次通过以下步骤实现：

(1)色素蛋白基因的获取：选取珊瑚礁或其它相关海洋生物体的相应组织提取基因组或合成相关的cDNA，扩增出表达色素蛋白的基因片段，或者直接向有关生物公司购买含有色素蛋白基因的载体；

(2)家蚕转基因载体的构建：依据目前家蚕公知公用转基因技术的要求，构建piggyBac表达载体，以眼和神经特异的启动子3xp3启动的红色荧光蛋白(DsRed)作为筛选标记，与家蚕丝素重链启动子启动获得的色素蛋白基因实现融合表达；

(3)家蚕胚胎显微注射：用白色茧家蚕品种作为原始材料，将初产下的卵解除滞育后在产卵后3h-6h用显微注射仪将10-15nl、总浓度400ng/ul的重组转座载体质粒和辅助载体质粒从蚕卵腹面中央注入已经解除滞育的蚕卵中，并用无毒的胶水封闭卵壳注射留下的小孔；

(4)转基因蚕的筛选：将注射完成的蚕卵在35-37％的甲醛蒸气中消毒5min后，置于25℃、相对湿度85％以上的条件下，进行催青直到孵化，饲养孵化出来的蚁蚕，将当代(G0)的蚕蛾进行自交或回交，获得G1代蚕卵，扫描G1代蚕卵获得转基因个体，即获得相应颜色蚕茧的转基因个体；

(5)彩色蚕茧转基因品系材料的获得：将筛选到的转基因阳性个体饲养至上簇采茧并进一步自交选纯，即获得能稳定遗传的彩色蚕茧转基因品系材料。

上述步骤中，h表示小时，min表示分钟。