[发明专利]一种二苯胍分子印迹固相萃取剂的制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种固相萃取剂的制备方法，特别是一种二苯胍分子印迹固相萃取剂的制备方法。

背景技术：

目前，二苯胍的测定手段有高效液相色谱法、薄层色谱法、液相-质谱联用技术等多种，但主要是用于二苯胍纯度检验或者实际样品中的定性分析，但尚未见到用此法对环境样品中二苯胍含量进行测定的报道。此外，当环境样品中二苯胍含量很低，不能满足仪器测定的灵敏度要求或者分析样品中共存物质干扰严重时，测定前须对样品中的二苯胍进行分离富集处理。固相萃取技术是目前常用的样品前处理技术，但传统的固相萃取剂大多是通用型的，选择性一般都不高。免疫吸附剂的出现虽然提高了选择性，但制备复杂，耗时长且可供选择的抗体种类少，机械强度及稳定性较差。

发明内容：

本发明的目的是提供一种简单、方便且能高效分离富集环境样品中的二苯胍的分子印迹固相萃取剂的制备方法。本发明的技术方案是，一种二苯胍分子印迹固相萃取剂的制备方法，其特征在于：(1)按二苯胍∶甲基丙烯酸∶乙二醇二甲基丙烯酸酯的摩尔比为1∶4∶20配料，先将二苯胍加入氯仿中完全溶解后，再加入甲基丙烯酸与二苯胍完全作用后，依次加入乙二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二异丁腈，超声2-5分钟，反复通氮气以驱除空气，将试管口密封后55-60℃下加热聚合反应24小时，(2)将上述块状聚合物磨碎、过筛制成80-160目粒度的粒状聚合物，用10％的冰乙酸/甲醇溶液索氏提取72小时，除去二苯胍和未聚合的功能单体及交联剂，(3)用甲醇洗涤上述索氏提取物，直到洗液呈中性后，在干燥箱中真空干燥后，即制成本发明的二苯胍分子印迹固相萃取剂。本发明与现有技术比较具有制备简单、选择性强、吸附量大和稳定性好的显著优点。

具体实施方式：

结合以下实施例对本发明作详细说明，首先制备二苯胍分子印迹固相萃取剂，其步骤有：

(1)称取0.5mmol二苯胍于试管中，加入5mL氯仿使之溶解，待完全溶解后，再加入2mmol甲基丙烯酸混匀后静置1小时使二苯胍和甲基丙烯酸充分作用，然后依次加入乙二醇二甲基丙烯酸酯10mmol和偶氮二异丁腈30mg，超声2-5分钟，反复通N₂15分钟以驱除空气，密封试管口后放入电热恒温水浴锅中，在55-60℃下加热24小时，完成聚合反应，得到坚硬的块状聚合物；

(2)将上述块状聚合物用研钵磨碎，过筛制成80-160目粒度的粒状聚合物，然后在索氏提取器中用10％的冰乙酸/甲醇溶液索氏提取72小时，除去模板分子和未聚合的功能单体及交联剂。

(3)用甲醇洗涤索氏提取后的聚合物以除去其中的冰乙酸，直到洗液呈中性后，在干燥箱中60℃真空干燥至恒重，即制成本发明的二苯胍分子印迹固相萃取剂，置于干燥器中备用。

用本发明的二苯胍分子印迹固相萃取剂通过上样，淋洗步骤后即可实现对二苯胍的选择性分离富集，其具体方法是，

(1)取50mg制好的二苯胍分子印迹聚合物装入一个可以控制流速的简易柱中，制成固相萃取柱，将二苯胍或其结构类似物溶在K₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲溶液(0.067mol/L，pH＝4.5)中或者乙腈中，然后以0.25ml/分钟的速度流过该柱；

(2)用10％的甲醇/K₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲溶液(0.067mol/L，pH＝4.5)(上样溶剂为K₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲液时)或者用0.5％的冰乙腈(上样溶剂为乙腈时)以0.13mL/分钟流速流过固相萃取柱，淋洗富集在固相萃取柱上的二苯胍或其结构类似物，收集淋洗液。

(3)用甲醇∶水∶乙酸的体积比为79∶20∶1的溶液和0.13mL/分钟的流速洗脱富集在固相萃取剂上的二苯胍，收集洗脱液。

文中提到的结构类似物有：盐酸吗啉胍，二苯氨基脲，二苯基硫脲，1，4-二苯氨基脲。

实验证明所制备的二苯胍分子印迹固相萃取剂其固相萃取吸附容量大，选择性好，可多次重复使用，寿命长，重现性好且方法简便。