[发明专利]一种八肽胆囊收缩素的制备方法

权利要求书

1.一种八肽胆囊收缩素的制备方法，其特征是包括以下步骤：

(1)制备保护的八肽胆囊收缩素-树脂复合物：向装有树脂的砂芯反应器中加入二甲基甲酰胺，静置，过滤，向反应器中加入八肽胆囊收缩素的C端氨基酸及酯化试剂进行反应，所述的氨基酸依次添加顺序为N-(9-芴甲氧羰酰基)-苯丙氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-4-{N-[1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己基乙烯基)-3-甲基丁基]氨}苄酯-天冬氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-蛋氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-色氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-甘氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-蛋氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-磺酸钠基-酪氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-4-{N-[1-(4，4-二甲基-2，6-二氧环己基乙烯基)-3-甲基丁基]氨}苄酯-天冬氨酸，反应结束后，加入二甲基甲酰胺洗涤树脂，并过滤，向反应器中加入哌啶和二甲基甲酰胺混合溶液进行脱保护反应，反应结束后加入二甲基甲酰胺洗涤树脂，向反应器中加入C端第二个氨基酸和缩合试剂缩合，缩合反应结束后加入二甲基甲酰胺洗涤树脂，过滤，按照多肽从C端到N端的顺序，更换氨基酸，重复脱保护和缩合反应，得到保护的八肽胆囊收缩素-树脂复合物；

(2)制备八肽胆囊收缩素-树脂复合物：向装有保护的八肽胆囊收缩素-树脂复合物的反应器中加入脱保护试剂进行脱保护反应，反应结束后过滤，并加入二甲基甲酰胺洗涤树脂，过滤，得到八肽胆囊收缩素-树脂复合物；

(3)切割，制备八肽胆囊收缩素粗品：向装有八肽胆囊收缩素-树脂复合物的反应器中加入切割试剂进行切割反应，反应结束后，过滤，收集滤液，旋蒸后得到八肽胆囊收缩素粗品；

(4)粗品经高效液相色谱纯化得到八肽胆囊收缩素精品：采用C₁₈类型的反相色谱柱分离纯化八肽胆囊收缩素粗品，得到八肽胆囊收缩素精品。

2.根据权利要求1所述的一种八肽胆囊收缩素的制备方法，其特征是步骤

(1)中所述的树脂为王氏树脂、苯乙酰胺甲基树脂或羟甲基树脂中的一种。

3.根据权利要求1所述的一种八肽胆囊收缩素的制备方法，其特征是步骤

(1)中所述的酯化试剂为N，N′-二异丙基碳二亚胺、1-羟基苯并三氮唑和二甲氨基吡啶，酯化试剂物质的量之比n(C端氨基酸)∶n(二异丙基碳二亚胺)∶n(1-羟基苯并三氮唑)∶n(二甲氨基吡啶)∶n(树脂)＝4∶4∶3∶0.5∶1；所述的缩合试剂为O-苯并三氮唑-N，N，N，N，-四甲脲六氟磷酸酯、1-羟基苯并三氮唑和二异丙基乙胺，缩合试剂物质的量之比n(氨基酸)∶n(O-苯并三氮唑-N，N，N，N，-四甲脲六氟磷酸酯)∶n(1-羟基苯并三氮唑)∶n(二异丙基乙胺)∶n(树脂)＝3∶3∶3∶6∶1。 

4.根据权利1要求的一种八肽胆囊收缩素的制备方法，其特征是步骤(2)中所述的脱保护试剂为：体积比为1％～5％肼和二甲基甲酰胺混合溶液，反应条件为：20℃～60℃下反应5min～60min。

5.根据权利1要求的一种八肽胆囊收缩素的制备方法，其特征是步骤(3)中所述的切割试剂为：体积比为20％氨水和四氢呋喃混合溶液，切割反应条件为：20℃下反应24h。

6.根据权利1要求的一种八肽胆囊收缩素的制备方法，其特征是步骤(4)中所述的分离条件为：制备柱为C₁₈类型，流动相为水、乙酸铵水溶液、乙腈、甲醇中的一种或几种。