[发明专利]可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法

权利要求书

1、一种可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

第一步，用O，O-二乙基硫代磷酰氯与4-氨基丁酸反应，合成含有多种有机磷农药共同结构-O，O-二乙基硫代磷酰基的通用半抗原O，O-二乙基-N-(3-羧基丙基)硫逐磷酰胺酯DENP；

第二步，采用碳二亚胺法将第一步得到的通用半抗原O，O-二乙基-N-(3-羧基丙基)硫逐磷酰胺酯DENP分别与牛血清白蛋白BSA、鸡卵清蛋白OVA进行偶联，制备通用免疫原DENP-BSA和通用包被原DENP-OVA；

第三步，采用第二步制备的免疫原免疫新西兰大白兔，得到多克隆抗体，即可检测多种有机磷农药残留的抗体。

2、根据权利要求1所述的可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法，其特征是，所述的第一步，具体为：

①取1.0gO，O-二乙基硫代磷酰氯溶于5mL甲醇，置于冰浴；

②称取KOH 0.69g和4-氨基丁酸0.67g，溶于5mL甲醇；

③在搅拌中，将氨基丁酸和KOH的混合溶液逐滴加入O，O-二乙基硫代磷酰氯溶液中，在冰浴中反应，过滤反应混合物，减压浓缩，然后用20ml NaHCO₃溶液将浓缩液转移到分液漏斗中，用10mL正己烷萃取，弃去有机相，再重复两次；

④然后用盐酸调节水相pH＝2，用10mL二氯甲烷萃取有机相，再重复两次；

⑤经无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到淡黄色油状物0.53g，即为产物通用半抗原O，O-二乙基-N-(3-羧基丙基)硫逐磷酰胺酯DENP。

3.根据权利要求2所述的可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法，其特征是，所述的在冰浴中反应，其时间为2h。

4.根据权利要求2所述的可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法，其特征是，所述的NaHCO₃溶液，其浓度为50mg/mL。

5.根据权利要求1所述的可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法，其特征是，所述的第二步，具体为：

①取52mg DENP溶于3mL无水二甲基甲酰胺DMF，加入116mg N-羟基琥珀酰亚胺NHS，191mg N，N’-二环己基碳二亚胺EDC，室温搅拌反应过夜；

②取133mgBSA或90mgOVA溶于15mL硼酸盐缓冲液；

③然后将活化半抗原溶液加入BSA或OVA溶液中，使半抗原与BSA或OVA的摩尔比为100∶1，室温反应2h后，于4℃反应过夜，透析获得纯化的完全抗原溶液。

6.根据权利要求5所述的可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法，其特征是，所述硼酸盐缓冲液，其浓度为0.2mol/L，pH8.7。

7.根据权利要求5所述的可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法，其特征是，所述室温反应，其时间为2h。

8.根据权利要求1所述的可检测多种有机磷农药残留的抗体制备方法，其特征是，所述第三步，具体为：以合成的通用免疫原，与等量弗氏佐剂混合后，采用皮内注射的方式免疫新西兰大白兔。