[发明专利]胃癌遗传检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种检测个体胃癌遗传易感性的试剂盒，通过同时检测与胃癌密切相关的白细胞介素-1β基因(IL-1B)、谷胱甘肽硫转移酶M1基因(GSTM1)、肿瘤坏死因子-α基因(TNF-α)、肿瘤坏死因子-β基因(TNF-β)、错配修复酶基因(hMLH1)、5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)上的单核苷酸多态性位点基因型来评估个体胃癌遗传易感性。

背景技术

胃癌是胃上皮的黏膜受化学致癌因素的刺激，在经历胃黏膜基因突变、非典型增生和原位癌这三个阶段之后而形成的恶性肿瘤，95％的胃恶性肿瘤是腺癌。该病可发病于任何年龄，其中男性的发病率是女性的1.5至2.5倍，发病的高峰年龄为50至80岁。胃癌早期70％以上毫无症状，中晚期出现上腹部疼痛、消化道出血、穿孔、幽门梗阻、消瘦、乏力、代谢障碍以及癌肿扩散转移而引起的相应症状。如果胃癌能早期发现，则癌肿会仅限于胃壁的粘膜层，5年的生存率可达95％。然而，目前很少有胃癌患者在早期被发现，导致5年生存率在20％～50％。

细胞因子白细胞介素-1(IL-1)是一种重要的炎症介质，它作为免疫反应的激素，是通过内分泌、自分泌和旁分泌等的相互作用来实现的。IL-1B也是一种很强的酸抑制剂，1mol的IL-1B是1mol质子泵抑制剂抑酸作用的100倍，是1mol H2受体拮抗剂抑酸作用的6,000倍。由于其抑酸作用强烈故可导致胃萎缩，从而增加胃癌发生的危险性。-31C/T是IL-1B启动子区域上的一个C/T多态位点，该多态导致IL-1B蛋白表达量上升。该位点有三种基因型：CC、CT、TT，其中TT为胃癌的风险基因型。当携带TT基因型时，HP感染引起的IL-1B分泌量异常增多，强烈地抑制胃酸分泌作用，使得胃部酸性下降，容易引起胃萎缩，最后诱发胃癌的发生。

谷胱甘肽硫转移酶(Glutathione S-transferases，GSTs)是一种可溶性的二聚体同工酶，具有强有力的催化效应，能催化底物分子亲电子中心与还原型谷胱甘肽的共轭结合，促进底物代谢转化和排出体外，是体内生物转化最重要的II相代谢酶之一。基因缺失(Null)是GSTM1常见的多态位点之一，该多态导致GSTM1酶活性显著下降。该位点有三种基因型，+/+、+/-、-/-分别代表无等位基因缺失/缺失一个等位基因/缺失两个等位基因(完全缺失型)，其中完全缺失型(空白基因型)与胃癌的发生有关。当GSTM1基因发生完全缺失时，机体各组织器官无GSTM1表达，因此也无GSTM1的解毒活性，对环境毒素和致癌物质的敏感性提高，易发生DNA突变和染色体畸变，患胃癌的风险因此显著增加。肿瘤坏死因子(TNF)是体内具有多种生物活性的重要致炎细胞因子，由细菌性物质刺激免疫细胞产生，具有较强的杀伤肿瘤细胞的作用。目前已知的TNF分为两种，TNF-α和TNF-β，主要由脂多糖激活的单核、巨噬细胞及淋巴细胞分泌，可以诱导产生TNF自身及IL-1、IL-6等其他细胞因子，增加人类I、II类白细胞抗原(HLA)表达，促进B、T细胞增殖及免疫球蛋白的合成，除突出的抗肿瘤特性外，还有抗病毒、广泛的诱导炎症和免疫调节功能，从而在自身免疫性疾病、感染性疾病和恶性肿瘤的发生发展过程中起重要作用。TNF-β基因和TNF-α基因都位于HLA基因簇内，与HLA I类及II类抗原基因相邻，该区域含有高密度的多态位点。TNF-β基因上研究较多的为第一号内含子内转录起始部位下游第252(+252)位点处G/A单核苷酸多态性，当+252位为G时，存在限制性内切酶Nco I的酶切位点；当该位点突变为A时，Nco I酶切位点缺失，TNF-β+252A等位基因可通过调节转录使TNF-α水平特征性增高。该位点三种基因型为GG、GA、AA，其中GA和AA是风险基因型，与胃癌患病风险上升有关。当携带有AA和AG基因型时，机体内发生炎症时产生的TNF-α水平明显升高。高水平的TNF-α可以诱导产生TNF-α自身及IL-1、IL-6、IL-8、IFN-γ等多种致炎细胞因子，扩大幽门螺杆菌(HP)感染后炎症反应，同时还能抑制胃酸分泌，增加胃黏膜萎缩的危险性，促进具有遗传毒性的炎症副产物的聚集而加重胃黏膜的损害及突变的发生率，从而促进胃癌的发生。