[发明专利]一种诊断日本血吸虫病的方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明涉及一种诊断日本血吸虫病 的方法及试剂盒。

背景技术

血吸虫亦称裂体吸虫或住血吸虫，隶属于吸虫纲、复殖目、裂体科、裂体 属。寄生人体的血吸虫主要有6种，即曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)，日 本血吸虫(S.japonicum)，埃及血吸虫(S.haematobium)，间插血吸虫(S. intercalatum)，湄公血吸虫(S.mekongi)和马来血吸虫(S.malayensis)，其中以 曼氏血吸虫、日本血吸虫和埃及血吸虫所引起的血吸虫病流行范围最广，危害 最大。血吸虫病(Schistosomiasis)主要分布于亚洲、非洲和拉丁美洲，而在 我国流行的是日本血吸虫病，并且由日本血吸虫感染所引起的病情也是最严 重，防治难度最大的，这主要是由于日本血吸虫动物宿主多；成虫寿命长；感 染后的伴随免疫和治愈后的免疫力差；中间宿主钉螺不易控制等特点。

日本血吸虫成虫为雌雄异体。雄虫乳白色，体长12-20mm，体表光滑，前 端有发达的口吸盘和腹吸盘。自腹盘以下，虫体向两侧延展，并略向腹面卷曲， 形成抱雌沟(gynecophoral canal)，雌虫停留其中，与雄虫呈合抱状态。雌虫体 长20-25mm，暗黑色，前端细小，后端粗圆。

随着全国性血吸虫病防治工作的展开，感染度降低，患者的虫卵负荷减少， 由此导致其病原学检查(粪便检查)的敏感度已不符合当前需要，粪样的采集 也日趋困难，免疫学检测方法日益成为血吸虫病的主要诊断手段，而其中的早 期免疫诊断更具有重要的意义。目前，用于血吸虫病免疫诊断最常用的抗原是 虫卵抗原、尾蚴抗原和成虫抗原。但这些虫源性抗原成分极其复杂；针对这种 抗原的血清抗体在宿主体内长期存在，不能区分现症感染和既往感染；这些虫 源性抗原不易大量获得，且其生产的质量监控等问题的存在制约了其在血吸虫 病诊断中的应用。随着分子生物学及免疫学的迅速发展与应用，血吸虫病的诊 断抗原由最初的粗抗原和各虫期抗原正在发展为由基因工程方法生产的重组 抗原。近年来研究比较深入的几种免疫诊断方法主要如下：间接血凝试验 (IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接荧光抗体试验(IFAT)、胶体染料试 纸条法(DDIA)。

目前血吸虫病诊断的抗原主要为天然的虫源性抗原。由于虫源性抗原的制 备步骤烦琐，产量低且不易质控，难以适应大规模现场普查的需求。而依靠基 因工程技术生产的重组抗原分子可为现场推广应用提供大量的抗原材料，但目 前尚无应用于诊断的重组抗原，也无早期诊断的试剂和方法，因此，须继续寻 找高敏感性和特异性的诊断抗原，以及早期诊断抗原。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可用于诊断血吸虫病的抗原。

本发明的另一目的在于提供一种诊断血吸虫病的方法。

本发明的另一目的在于提供一种诊断血吸虫病的试剂盒。

在本发明的第一方面，提供一种分离的血吸虫SjP7蛋白，该蛋白选自下组：

(a)具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的蛋白；

(b)将SEQ ID NO：2氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失 或添加而形成的，且具有(a)蛋白的功能的由(a)衍生的蛋白。

在本发明的第二方面，提供一种分离的多核苷酸，所述的多核苷酸编码所 述的血吸虫SjP7蛋白。

在另一优选例中，所述的多核苷酸具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

另一方面，提供一种载体，所述的载体含有所述的多核苷酸。

另一方面，提供一种遗传工程化的宿主细胞，所述的宿主细胞含有前述的 载体或其基因组中整合有所述的多核苷酸。

另一方面，提供一种抗体，所述的抗体特异性结合所述的蛋白。

在本发明的第三方面，提供所述的蛋白或编码该蛋白的多核苷酸的用途， 用于制备检测血吸虫病的试剂或试剂盒。

在另一优选例中，所述的血吸虫为日本血吸虫(Schistosoma japonicum)或 曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)。

在本发明的第四方面，提供一种检测血吸虫病的试剂盒，所述的试剂盒中含 有：

SjP7蛋白；或

特异性结合SjP7蛋白的抗体；或

特异性扩增SjP7基因的引物；或