[发明专利]叶酸－多肽复合物介导的靶向抗肿瘤前体药物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物与医药技术领域，具体涉及一种叶酸-多肽复合物介导的靶向抗肿瘤前体药物及其制备方法。

背景技术

靶向抗肿瘤分子药物是依据肿瘤细胞与正常细胞之间分子生物学上的差异，选择性作用于靶细胞的基因、酶、信号传导分子等，从而达到治疗的目的。这样的例子有作用于表皮生长因子受体(EGFR)的单克隆抗体艾布妥斯(cetuximab)；乳腺癌细胞HER-2的胞外区的人源化单克隆抗体赫赛汀(trastuzumab)；作用于血管内皮细胞生长因子(VEGF)受体的单克隆抗体阿伐斯汀(bevacizumab)；小分子EGFR酪氨酸激酶抑制剂(gefitinib，erlotinib)等等。虽然靶向抗肿瘤分子药物治疗是一种理想的治疗方式，但单药使用效果并不佳，尚存在许多问题。其中由于肿瘤细胞基因的不稳定性，肿瘤细胞往往通过靶分子的调变或缺失逃避药物的攻击，致使分子靶向药物失去疗效就是一个亟待解决的课题。

近年来，研究者开始将目光转向基因组稳定的肿瘤间质细胞。在肿瘤间质中，成纤维细胞通过与肿瘤细胞相互作用而活化，这种活化成纤维细胞被称为肿瘤相关成纤维细胞(Carcinoma-AssociatedFibroblasts，CAF)[Bhowmick NA，et al.Nature.432(7015)：332-7.2004.]。大量证据表明，CAF对肿瘤的发生发展起着必要的支持促进作用，比如表达细胞因子、蛋白酶及粘附分子等促进肿瘤浸润与转移[Tuxhorn JA，et al.Clin Cancer Res.8(9)：2912-23.2002.]。鉴于CAF对于肿瘤发生发展的重要性，选择这群细胞为靶标，切断其对肿瘤细胞的支持促进作用，不失为提高肿瘤靶向治疗有效性的必要措施。

近年发展起来的酶激活式靶向前体药物设计为实现肿瘤靶向治疗目标带来了新思路。其核心内容是将细胞毒性小分子药物与起特殊导向作用的物质交联，屏蔽其活性基团，从而形成暂时无活性的前体药物。前体药物进入体内，以非活化形式被输送至靶部位，继而利用靶部位现存的选择性激活机制，使其活性母体药物得以释放。其中发展多肽修饰技术已成为酶激活式前药设计领域的重要趋势。这是由于肽键不易被化学降解，而可降解肽键的酶类大多存在于细胞内或细胞表面，因此，由多肽修饰的药物在血液循环中十分稳定，到达靶部位的可能性大大增加，被靶部位细胞上的酶水解后释放原型药物发挥药理作用。许多抗肿瘤小分子化学药物的结构中含有可发生酰化反应的游离氨基，并且这些游离氨基往往影响着药物的化学和生物学特性，一旦被其他化学基团修饰或封闭，将导致药物的细胞毒性显著降低，而去除修饰基团其细胞毒性则即可恢复。这些药物包括：阿霉素(doxorubicin，Dox)、刺孢霉素(calicheamicin，Cal)、道诺霉素(daunomycin，DM)等等。Trouet报道，阿霉素的四肽衍生物N-alanyl-leucyl-alanyl-leucyl-Dox对正常小鼠及荷瘤小鼠的毒性仅为阿霉素的1/9。[Trouet A，et al.Cancer Res.61(7)：2843-6.2001.]依据前列腺特异性抗原(PSA)具有前列腺肿瘤定位特异性和丝氨酸蛋白酶水解活性，Denmeade等用Hi s-Ser-Ser-Lys-Leu-Glu-ku 7肽序列修饰阿霉素，获得无活性阿霉素前体药物Mu-HSSKLQ-Leu-Dox，该前药可被PSA水解并释放出阿霉素。[Denmeade SR，et al.CancerRes.58(12)：2537-40.1998.]。成纤维细胞激活蛋白α(FibroblastActivation Proteinα，FAPα)是新近发现的特异性表达于CAF表面的丝氨酸蛋白酶，不但具备肽链端解酶活性，而且具备肽链内切酶(endopeptidase)的活性。FAPα可选择性作用于脯氨酸与修饰物之间的肽键，迅速将其水解成Z-GP二肽和具有活性的修饰物。[EdosadaCY，et al.FEBS Lett.2006 Mar 6；580(6)：1581-6.]。研究证实，甘氨酸一侧连有不同的氨基酸或基团时，FAPα的水解活性有显著差异。当与甘氨酸顺次相连的序列为丝氨酸和丙氨酸时，即ASGP，FAPα表现出最佳的水解活性。