[发明专利]修饰的安卡拉（MVA）痘苗病毒基因的基因组中保守基因之间的基因间位点

说明书

相关申请

本申请要求保护2006年8月25日提交的美国临时申请号60/840,093和 2006年8月28日提交的美国临时申请号601840,755的权益，所述两份文献因 而公开地在此处通过引用的方式完整并入。

技术领域

本发明涉及用于稳定整合外源DNA序列至MVA基因组内的插入位点。

相关技术的描述

痘病毒科的成员具有编码数百种蛋白质的庞大双链DNA基因组(《费氏病毒学，第五版》Moss，B.2007“痘病毒科：病毒及其复制”(″Poxviridae：The Viruses and Their Replication″in Fields Virology，5th Ed)(D.M.Knipe，P.M. Howley，D.E.Griffin，R.A.1 Lamb，M.A.Martin，B.Roizman和S.E.Straus，Eds)， LippincottWilliams & Wilkins，Philadelphia，PA)。已知高度减毒的痘苗病毒株- 修饰的安卡拉痘苗病毒(MVA)的基因组序列(Sutter，G.和Moss，B.1992美 国科学院院报(Proc Natl Acad Sci USA)89：10847-10851；和Sutter，G.等1994 疫苗(Vaccine)12：1032-1040)，其中所述的修饰的安卡拉痘苗病毒不能生长 在大多数哺乳动物细胞中并且是重组疫苗载体的良好候选物。修饰的安卡拉痘 苗病毒已经在鸡胚成纤维细胞中传代超过570次，在此期间相对于宿主范围严 格限制的亲代野生型Ankara株而言，6个重大缺失已经出现(Meyer，H.等1991 普通病毒学杂志(J Gen Virol)72：1031-1038)。

发明简述

本发明涉及用于整合外源序列至痘苗病毒基因组的基因间区(IGR)内的 新插入位点，其中所述的IGR位于该痘苗病毒基因组的两个相邻开放阅读框 (ORF)之间或所述的IGR位于该痘苗病毒基因组的两个相邻开放阅读框的 侧面，并且其中所述ORF对应于保守基因，并涉及用来插入外源DNA至痘 苗病基因组内的相关质粒载体，并且还涉及作为药物或疫苗的含有插入所述新 插入位点内的外源序列的重组痘苗病毒。

附图说明

图1.基于pol基因序列同一性的HIV-1和HIV-2的系统发生学关系。 SIV_cpz和SIV_smm是分别从黑猩猩(chimpanzee)和白眉猴(sooty mangabey monkey)中回收的类人灵长类慢病毒。

图2.基于全长pol基因序列的具有四种不同SIV_cpz分离株的HIV-1 M组、 N组和O组(group)的系统发生学关系。短棒表示遗传距离0.1(10％核苷酸 趋异性)并且星号指出基于env序列的N组HIV-1分离株的位置。

图3.HIV-1分离株的嗜性及生物学特征。

图4.HIV-编码的蛋白质。显示HIV基因的位置、初级翻译产物(在一 些情况下是多聚蛋白)的尺寸和加工的成熟病毒蛋白。

图5.成熟HIV-1病毒粒子的示意图。

图6.HIV-1 Env糖蛋白的线性示意图。箭头1表示gp1 60切割成gp120 和gp41的位点。在gp120中，交叉线区域代表可变结构域(V₁-V₅)并且空心 框描述保守序列(C₁-C₅)。在gp41胞外结构域中，显示几个结构域：氨基端 融合肽和两个胞外结构域螺旋(氨基端螺旋与羧基端螺旋)。跨膜结构域由黑 色框代表。在gp41胞浆结构域中，显示Tyr-X-X-Leu(YXXL)内吞基序(SEQ ID NO：1)和两个预测性螺旋结构域(螺旋-1和螺旋-2)。氨基酸编号被标出。

图7.pLW-73转移载体。

图8.pLW-73转移载体的核苷酸序列(上部链，SEQ ID NO：2；底部链， SEQ ID NO：3)。

图9.编码乌干达进化枝D Env蛋白(分离株A07412)的核苷酸序列(SEQ ID NO：4)。