[发明专利]具有免疫作用的质粒

说明书

描述

本发明的目标体现为用于转染真核和原核细胞的重组质粒，其具有介 于7和12千碱基(kbase)的长度，并包含编码免疫球蛋白的重链的序列。 本发明的进一步目标体现为前述质粒用于在人类或动物生物体中诱导免 疫应答的药物制剂或疫苗制备的用途或治疗性处理的用途。

特别地，所描述和要求保护的是用于构建质粒的碱基序列，所述质粒 可用于：

-转染原核或真核细胞(间接体内(ex vivo))的过程，所述原核或真核 细胞可接种于高等生物以诱导预防性或治疗性免疫应答(特别是用具 有序列SEQ ID NO.1的质粒1)；

-基因免疫方法学中定向接种(direct inoculation)(体内)于高等生物的 方案，以诱发预防性或治疗性免疫应答(特别是用具有序列SEQ ID NO.2的质粒2)。

还描述了可使用所述质粒治疗的病理学特性(profile)。

技术状态

质粒来源的DNA可通过已知方法用于转染原核和真核细胞。为此目 的构建的质粒一般由具有编码某个蛋白的遗传物质的插入单元的骨架构 成，所述蛋白可提供或可不提供其自身的生物学活性。

所述质粒可以是商业来源的，其中携带特异性的部分根据在所述质粒 所指定的生物体中待重建的某个特性被引入已经知道和使用或自发产生 (即通过组装选择的遗传物质的片段)的结构构建体。

质粒合成是对于获得需要的细胞性能的目的具有基本重要性的操作。 质粒决定转染和转基因蛋白合成的效率，并且也决定转染的安全性，并由 此在最终的分析中决定转染细胞的蛋白表达的综合效率。

质粒是遗传数据的载体，遗传数据影响宿主细胞的细胞周期，并因此 影响容纳(hosts)这些转染的细胞的生物体的生命周期：向质粒中引入的 数据越多，在转染过程中遇到的风险越大。

质粒的特征在于所包含的数据的特异性：其复杂性越小，则其越易合 成，其使用越安全。

质粒执行转染细胞群体的能力，这或多或少自发地取决于细胞的类型 和执行转染的接触/温育实验条件。质粒对特定细胞群体的选择性越强，其 在安全条件下的用途越大。

执行转染的条件对其成功具有决定作用：待转染细胞的均质性和浓 度、温育时间和条件、使用特异性和选择性方法监控现象的可能性构成了 决定操作成功的极其重要的因素。

在使用质粒在患者体内转染待注射细胞的特异性情况下，对所述细胞 的操作要极其小心，因为它们必须重新插入患者，并且不能有危险和致命 的间接现象：操作必须要少，方法的安全性越高，结果的可重现性越大。

由上所述，必然得出，使用具有降低的大小的质粒，特别是如果与具 有有限操作的方法结合，是用于预防性和治疗性目的的转染中优选的条 件。

在自体转染方法中使用编码免疫原性表位的质粒是可用于在一些病 理学中诱导特异性免疫应答的系统之一，所述病理学的特征在于出现感染 媒介(infecting agent)，或在于自发的或诱导的细胞突变(致癌作用)，并且 选择的细胞或细胞系的凋亡过程具有修饰。

WO 90/09804描述了基因工程设计免疫球蛋白，其在所述免疫球蛋白 的可变区或结合结构域表达预定的肽表位。

WO 00/61766描述了端粒酶(telomerasis)来源的肿瘤抗原，其可用于产 生针对端粒酶和因此针对肿瘤自身的T细胞介导的应答。

WO 00/64488描述了编码嵌合的免疫球蛋白重链的质粒，pNγ₁V_H62质 粒，其是通过将鼠V_H62基因亚克隆至含有编码人类γ₁恒定区的序列的pNγ₁质粒获得的。此质粒可通过在可变区的任何互补性决定区域 (complementarity determining regions)引入异源表位进行修饰。因此，公开 了其在用于诱导免疫应答的方法中的应用。

但是，如果将pNγ₁V_H62质粒注射至人类，此质粒含有有害的部分。 此外，此质粒的大小使其获得非常低的转染产率(transfection yield)。

发明描述