[发明专利]血管瘤集落形成细胞

权利要求书

1.体外产生和扩增人血管瘤集落形成细胞的方法，所述方法包括步骤：

(a)在存在至少一种足够将人胚胎衍生细胞诱导分化成胚状体的量的生长 因子的情况下，在无血清培养基中培养包含所述胚胎衍生细胞的细胞培养物； 和

(b)向所述含胚状体的培养物中加入至少一种生长因子，并继续在无血清 培养基中培养所述培养物，其中所述生长因子的量足够使人血管瘤集落形成细 胞在所述胚状体培养物中扩增，

其中在所述方法步骤(a)和(b)的整个过程中使所述胚胎衍生细胞、胚 状体和血管瘤集落形成细胞在无血清培养基中生长。

2.体外产生和扩增人血管瘤集落形成细胞的方法，所述方法包括步骤：

(a)在存在至少一种足够将人胚胎衍生细胞诱导分化成胚状体的量的生长 因子的情况下，在无血清培养基中培养包含所述胚胎衍生细胞的细胞培养物； 和

(b)向所述含胚状体的培养物中加入至少一种生长因子，并继续在无血清 培养基中培养所述培养物，其中所述生长因子的量足够使人血管瘤集落形成细 胞在所述胚状体培养物中扩增，

(c)将所述胚状体解聚为单细胞；

(d)向所述含所述单细胞的培养物中加入至少一种生长因子，并继续在无 血清培养基中培养所述培养物，其中所述生长因子的量足够使人血管瘤集落形 成细胞在含所述单细胞的培养物中扩增，

其中在所述方法步骤(a)-(d)的整个过程中使所述胚胎衍生细胞、胚 状体和血管瘤集落形成细胞在无血清培养基中生长。

3.权利要求1或2的方法，其中所述胚胎衍生细胞是胚胎干细胞。

4.权利要求1或2的方法，其中所述生长因子是包括同源异型盒蛋白，或 其功能变体，或活性变体的蛋白。

5.权利要求4的方法，其中所述同源异型盒蛋白包括HOXB4蛋白，或其功 能变体，或活性变体。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述生长因子选自血管内皮生长 因子(VEGF)、骨形态生成蛋白(BMP)、干细胞因子(SCF)、Flt-3L(FL)促血 小板生成素(TPO)和促红细胞生成素(EPO)。

7.权利要求6的方法，其中在细胞培养的0-48小时内将所述血管内皮生 长因子(VEGF)或骨形态生成蛋白(BMP)，或两者加入到步骤(a)。

8.权利要求6的方法，其中从开始步骤(a)的48-72小时内将所述干细 胞因子(SCF)、Flt-3L(FL)或促血小板生成素(TPO)，或它们的任何组合加 入到所述培养物中。

9.权利要求4-5中任一项的方法，其中从开始步骤(a)的48-72小时 内将所述生长因子加入到步骤(b)。

10.权利要求5的方法，其中从开始步骤(a)的48-72小时内将所述生 长因子加入到培养步骤(b)。

11.权利要求1的方法，还包括向步骤(b)加入促红细胞生成素(EPO) 的步骤。

12.权利要求2的方法，还包括向步骤(b)和(d)加入促红细胞生成素 (EPO)的步骤。

13.权利要求1-3中任一项的方法，还包括从所述培养物中纯化所述人血 管瘤集落形成细胞的步骤。

14.权利要求13的方法，其中所述纯化所述血管瘤集落形成细胞的步骤包 括使用带抗CD71抗体的免疫亲合柱层析的步骤。

15.权利要求1-3中任一项的方法，还包括从所述培养物中分离所述人血 管瘤集落形成细胞的步骤。

16.权利要求15的方法，其中所述分离所述血管瘤集落形成细胞的步骤包 括按细胞大小和/或形态分离所述血管瘤集落形成细胞的步骤。

17.权利要求4-5中任一项的方法，其中所述生长因子是包括HOXB4和蛋 白转导域(PTD)的融合蛋白。