[发明专利]人巨细胞病毒重组蛋白质及其制备方法

权利要求书

1.一种人巨细胞病毒重组蛋白质，其特征在于，含有SEQ ID No.1所示的氨基酸残基序列，所述的重组蛋白质从N-末端到C-末端依次含有人巨细胞病毒gp52从N-末端第261位到第380位的120个氨基酸、pp150从N-末端第587位到第640位的54个氨基酸、pp65从N-末端第361位到425位的65个氨基酸、gB从N-末端第200位到243位的44个氨基酸及pp28从N-末端第95位到128位的34个氨基酸。

2.根据权利要求1所述的人巨细胞病毒重组蛋白质，其特征在于，所述重组蛋白质的DNA序列如SEQ ID No.2所示，其中，gp52目的肽段DNA序列是gp52第781位到第1140位核苷酸，pp150目的肽段DNA序列是第1 759位到第1920位核苷酸，pp65目的肽段DNA序列是第1081位到第1275位核苷酸，gB目的肽段DNA序列是第598位到第729位核苷酸，pp28目的肽段DNA序列是第283位到第384位核苷酸。

3.一种如权利要求1所述的人巨细胞病毒重组蛋白质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)分别将人巨细胞病毒中gp52、pp150、pp65、gB和pp28中目的DNA片段扩增，重组，得到gp52pp150pp65gB pp28重组片段；

(2)将pET28a载体与PCR扩增产物经NdeI和XhoI双酶切，连接后转化，测序鉴定重组子；

(3)转入表达菌株进行诱导培养，处理菌体收获重组蛋白，经纯化后得到人巨细胞病毒重组蛋白。

4.根据权利要求3所述的人巨细胞病毒重组蛋白质的制备方法，其特征在于，其步骤(1)具体包括以下内容：

(a)设计用于扩增gp52目的DNA片段的PCR引物对(p1，p2)、用于扩增pp150目的DNA片段的PCR引物对(p3，p4)、用于扩增pp65目的DNA片段的PCR引物对(p5，p6)、用于扩增gB目的DNA片段的PCR引物对(p7，p8)和用于扩增pp28目的DNA片段的PCR引物对(p9，p10)，引物p1和p10分别带有NdeI和XhoI的酶切位点，引物p2和p3顺序互补，并共同对应于gp52上述片段的3’末端和pp150上述片段的5’末端序列，引物p4和p5顺序互补，并共同对应于pp150上述片段的3’末端和pp65上述片段的5’末端序列，引物p6和p7顺序互补，并共同对应于pp65上述片段的3’末端和gB上述片段的5’末端序列，引物p8和p9顺序互补，并共同对应于gB上述片段的3’末端和pp28上述片段的5’末端序列；

(b)以人巨细胞病毒培养物为模板，以引物P1和P2扩增gp52片段，以引物P3和P4扩增pp150片段，以引物P5和P6扩增pp65片段，以引物P7和P8扩增gB片段，以引物P9和P10扩增pp28片段；再以第一轮PCR扩增得到的gp52片段和pp150片段为模板，加入引物P1和P4，扩增gp52 pp150片段，以第一轮PCR扩增得到的pp65片段和gB片段为模板，加入引物P5和P8，扩增pp65gB片段；然后以第二轮PCR扩增得到的gp52pp150和pp65gB片段为模板，加入引物P1和P8，扩增gp52pp150pp65gB；最后以扩增得到的片段gp52pp150pp65gB和pp28为模板，加入引物P1和P10，扩增gp52pp150pp65gB pp28片段，得到串联的目的基因重组片段：gp52pp150pp65gB pp28。

5.根据权利要求3所述的人巨细胞病毒重组蛋白质的制备方法，其特征在于，其步骤(2)具体为：将pET28a载体与PCR扩增产物经NdeI和XhoI双酶切，产物纯化后经T₄DNA连接酶连接，连接产物转化大肠杆菌Top10感受态，涂布于含卡那霉素的LB平板上，37℃倒置培养过夜，次日挑选平板上生长的菌落，进行PCR和DNA测序鉴定，得到正确的阳性转化子。

6.根据权利要求3所述的人巨细胞病毒重组蛋白质的制备方法，其特征在于，其步骤(3)具体为：提取阳性转化子质粒，用化学转化法转入BL21系列中的DE3感受态菌，在含卡那霉素的LB平板上37℃倒置培养过夜，次日挑选平板上生长的菌落用含卡那霉素的LB培养基培养，用IPTG诱导LB培养的表达菌株，诱导表达后收获菌体，经超声破菌、组氨酸亲和柱和离子交换柱层析得到纯化的重组蛋白质。