[发明专利]一种荧蒽包被原FL－OVA及制备和用途

说明书

技术领域

本发明属荧蒽的多克隆抗体领域，特别是涉及一种荧蒽包被原FL-OVA及制备和用途。

背景技术

多环芳烃(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs)指两个以上苯环连在一起的化合物，如萘、蒽、菲、荧蒽、苯并芘等。近年来，海上石油开采，轮船运输、海损溢油，工业、生活燃烧废气排放等使得多环芳烃等有机污染日益严重，大量调查研究表明，空气、土壤、水体及生物体等都受到了多环芳烃的污染。多环芳烃是最早发现且数量最多的致癌物，目前已经发现的致癌性多环芳烃及其衍生物已超过400种，每年排放到大气中的多环芳烃约几十万吨，因其毒性、生物蓄积性和半挥发性以及在环境中的持久存在，已经受到国际科学界的广泛关注。1976年美国环保局提出129种“优先控制污染物”中，多环芳烃类化合物就有16种；欧盟最新有害物质禁令中也列入了16种多环芳烃；1990年我国提出的水中优先控制的68种污染物中，多环芳烃类化合物就占7种，在这些多环芳烃中检出率最高的是苯并[b]荧蒽、荧蒽和苯并[k]荧蒽，检出率分别为59％，48％和46％。

荧蒽是多环芳烃中较常见的物质，存在于煤焦油的蒽油馏份中，经分馏精制而得，可用做非磁性金属表面探伤荧光剂，也可用于制造合成染料和药物等。纯品荧蒽为白色或黄绿色针状或片状结晶，能溶于乙醇、二硫化碳及苯等有机溶剂中。目前对荧蒽的检测主要采用高效液相色谱和气相色谱等分析方法，这些方法虽然准确可靠，可是由于对样品的预处理复杂、耗时且需要大量有机溶剂萃取，并且在之后的检测过程中要用到精密昂贵的检测仪器而不适于推广使用，也不利于当环境污染事故发生在野外时的现场快速检测。因而寻求一种快速、简便、灵敏且经济实用的分析方法成为当前研究的主要方向。

20世纪60年代发展起来的免疫分析(Immmunoassay，IA)是基于抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应的分析技术。免疫反应涉及抗原与抗体分子间的立体化学、电荷、氢键和偶极间的综合应用，具有常规理化分析技术无可比拟的选择性和高灵敏度，非常适宜于复杂基质中痕量组分的分析。因此，免疫分析具有特异性强、灵敏度高、方便快捷、分析容量大、检测成本低、安全可靠等优点，满足简单、快速、灵敏地检测环境激素的要求。1985年美国Cetus公司的K.B.Mullis和R.K.Saiki等发明了一种特异性DNA体外扩增技术，这个方法实质是体外酶促合成特异性DNA片断，又称无细胞分子克隆系统，将这一技术称为Polymerase Chain Reaction简称PCR，即聚合酶链式反应。1992年Sano等将免疫分析技术与PCR技术相结合，新研究出来的免疫PCR技术由于兼具了免疫分析技术特异性强和PCR技术灵敏度高的优点，因而将在环境微量痕量污染物的检测中会有很好的应用前景。

目前尚未见有用免疫分析方法检测荧蒽的报道，更没有见用免疫PCR技术检测荧蒽的相关报道。而合格的荧蒽抗原是免疫得到合格荧蒽抗体的前提，合格的荧蒽抗体是建立荧蒽免疫检测方法的关键，有关荧蒽抗原抗体的制备，国内外还未见报道。

发明内容

要解决的技术问题

本发明要解决的技术问题是提供一种荧蒽包被原FL-OVA及制备和用途，以克服现有检测技术中对荧蒽样品预处理复杂、耗时、且需要大量有机溶剂萃取，以及在检测过程中要用到精密昂贵的检测仪器而不适于推广使用和不利于当环境污染事故发生在野外时的现场快速检测等缺点。

技术方案

本发明的一种荧蒽包被原FL-OVA，其结构式如下：

其中OVA是卵清蛋白。

本发明的一种荧蒽包被原FL-OVA的制备，采用混合酸酐法合成荧蒽人工包被原，其反应方程式如下：

本发明的一种荧蒽包被原FL-OVA的制备方法，包括以下步骤：

(1)荧蒽半抗原的合成：将丁二酸酐、荧蒽、无水三氯化铝三者按摩尔比1∶1∶2.2投料，并溶解于硝基苯中，得到无色溶液，冰浴下搅拌反应，整个反应在0-4℃冰浴下进行7-8小时后，加入稀盐酸终止反应；将烧瓶中的液体倒出，加稀盐酸水解，分离出的有机层用大量稀盐酸水洗后，旋转蒸发除去硝基苯，得到黄色固体粉末；在甲醇-乙醚中重结晶获得黄色晶体状的荧蒽半抗原，干燥后得纯品。