[发明专利]一种用微生物发酵技术生产复合胆红素盐的方法

说明书

所属技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，用微生物发酵技术生产复合胆红素盐的方法。

背景技术

天然牛黄作为传统名贵中药材，是中成药的重要原料。长期以来，药源紧缺，难以满足临床用药的需要，大量牛黄依赖进口。为此，为解决天然牛黄资源紧缺问题，医药专家一直在寻找牛黄的替代品，自1972年国家陆续批准了3个牛黄代用品，即：人工牛黄、培植牛黄和体外培育牛黄。目前作为天然牛黄原料的替代用品，除了培植牛黄外，其他都是在牛体外生产的产品，而医药市场也是以在牛体外生产的产品为主。天然牛黄形成的过程是一个生命历程，天然牛黄的替代用品无论从机理、工艺、成分、结构还是药效等方面，都试图与天然牛黄接近。研究表明，无论是胆红素钙结石还是胆固醇结石，都与胆汁中胆汁酸盐减少有关，其胆酸受细菌的影响也是较严重的，牛黄中几乎不存在游离胆酸的吸收峰，而主要是牛磺酸和甘氨酸结合的胆汁酸，游离胆酸不是牛黄的主要成分，更不是成石的原因。体外胆汁中的胆红素是极不稳定的，极容易被破坏，牛磺胆酸钠的存在可使胆红素钙盐沉淀颗粒变小，颗粒的聚集程度减小。还有，胆汁中的所有的有机和无机成分是在一个复杂和共生的环境下存在并逐步交织在一起，最终形成特有的复杂成分和结构。而现在上市的体外生产的牛黄代用产品，其原理与天然牛黄形成相背离，其所谓的工艺与天然牛黄的形成过程完全不同，成分中包括胆红素盐、胆酸、以及去氧胆酸等的复合胆红素盐均是直接加入的，所以实质是化学方法制备的牛黄代用品。所以复合胆红素盐的科学合理的制备是牛黄代用品最关键的技术和工艺。

现有的天然牛黄代用品中复合胆红素盐的制作方法中存在以下不足：一、复合胆红素盐中成分的形成与胆汁发酵不同步，不是一个生物生长过程。二、以胆红素钙为主要成分的复合胆红素盐的形成过程是一个化学反应过程；胆酸类物质是直接添加游离的化学纯。三、即使有胆汁的发酵，但其过程与包括以胆红素钙为主要成分的复合胆红素盐和胆酸类物质形成过程是分离的。四、胆汁中的细菌的生长繁殖不是一个自然的过程，而是运用单一或者几种筛选出的菌株进行接种发酵。五、现行的牛黄代用品所谓的品质控制是基于其质量标准的型式检测，所以其满足的是检测指标而已。

发明内容

本发明目的旨在提供一种用微生物发酵技术生产复合胆红素盐的方法，弥补现有天然牛黄的替代品中制作复合胆红素盐关键技术的诸多缺陷不足，使其不只是满足所谓的品质控制是基于其质量标准的检测指标等型式检测，而是从机理、工艺、成分、结构、药效等方面更与天然牛黄接近，使天然牛黄的替代品发挥起应有的作用。

鉴于上述目的得以实现，本发明提供的技术方案如下：

本复合胆红素盐的制作方法，是用新鲜牛胆汁与牛黄的相关成分组成发酵底料配方和发酵补料配方，发酵底料在发酵罐开放自然环境下染菌发酵，经过补料分批培养发酵，使复合胆红素盐逐步形成，用蒸气灭菌沉淀、蒸发浓缩、喷雾干燥为成品复合胆红素盐。

上述制作工艺中，发酵底料配方为：新鲜牛胆汁500-1000ml、牛磺酸5-10g。其优选配方为：新鲜牛胆汁600ml、牛磺酸5g。新鲜牛胆汁是指新鲜得到或新鲜得到并置于2-4℃冷藏保存的胆汁。

上述制作工艺中，新鲜牛胆汁直接加入牛磺酸组成底料发酵液。

上述制作工艺中，发酵补料配方为：新鲜牛胆汁1000-1500ml、牛磺酸5-10g、胆红素35-50g、胆酸5-15、去氧胆酸3-8g、氢氧化钙10-20g、硫酸锌1-2g、硫酸镁1-2g。其优选配方为：新鲜牛胆汁1200ml、牛磺酸8g、胆红素40g、胆酸10、去氧胆酸5g、氢氧化钙15g、硫酸锌1g、硫酸镁1g。

上述制作工艺中，新鲜牛胆汁加入其他补料成分，并加入同比例的蒸馏水充分搅拌后组成补料发酵液。

上述制作工艺中，上述底料发酵液和补料发酵液在不锈钢的配料罐中完成；发酵在不锈钢的发酵罐中进行。

上述制作工艺中，将底料发酵液在温度30-45℃的开放自然环境下染菌并进行发酵，发酵周期为48-72小时，发酵过程在30-60转/分进行转动搅拌。其中的细菌包括大肠杆菌、肠球菌但不限于以上细菌范围。优选温度为40℃，转速为60转/分。

上述制作工艺中，底料发酵后进行两次间歇地补料发酵；第一次在底料发酵后进行，发酵36-48小时后进行第二次在补料发酵，温度仍在30-45℃范围内，发酵过程在30-60转/分进行转动搅拌。优选温度、转速同上。