[发明专利]检测残留兽药的荧光微球免疫层析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种检测残留兽药的荧光微球免疫层析试纸条的制备方法，所述试纸条由底板、 滤纸、样本垫、荧光微球垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成，在所述底板上依次搭接地粘 贴滤纸、样本垫、荧光微球垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述的荧光微球垫上喷涂有荧 光微球标记的抗克伦特罗单抗，所述的硝酸纤维素膜上包被有克伦特罗人工抗原作为检 测区和包被有抗鼠抗体作为质控区；

所述试纸条的制备方法包括如下的步骤：

(1)硝酸纤维素膜的制备：

①制备克伦特罗-BSA偶联物人工抗原：

采用重氮法偶联克伦特罗-BSA；

②检测区和质控区的制备：

克伦特罗-BSA偶联物和抗鼠抗体包被到硝酸纤维素膜上：用0.01M pH7.2的磷酸盐 缓冲液调节克伦特罗-BSA偶联物的浓度为0.5mg/ml，所得的溶液在膜上喷涂作为检测 区，用0.01M pH7.2的磷酸盐缓冲液调节抗鼠抗体的浓度为0.5mg/mL，所得的溶液在膜 上喷涂作为质控区，两区的喷膜量均为0.74μl/cm，两区位置相隔5mm，质控区距吸水纸 一端2mm，37℃烘干处理过夜后，于室温干燥的环境下保存备用；

步骤(1)中所述磷酸盐缓冲液是包含5％蔗糖和0.05％吐温-20的磷酸盐缓冲液；

(2)荧光微球垫的制备：

荧光微球标记的抗克伦特罗单抗的制备：取1mg包裹有香豆素的荧光微球1000×g 离心10～15min，离心后收集沉淀用0.01M pH4.8的硼酸盐缓冲液调节微球浓度为 OD₄₅₀＝0.2，然后分别加入80μl的20mg/mL对乙基-N，N-二甲基丙基碳二亚胺，和130μl的 2～20mg/mL氮羟基琥珀酰亚胺，用pH 4.8的硼酸盐缓冲液溶解，振荡混匀后，室温孵育 10～30min后，1000×g离心5～15min，沉淀用pH 4.8的硼酸盐缓冲液溶解，调节微球 浓度OD₄₅₀为0.2-1.0，1mL荧光微球中加入1μg的抗克伦特罗单抗，充分混合后，室温 搅拌反应3小时，超纯水离心洗涤3次，沉淀用0.01M pH7.2的磷酸盐缓冲液复溶沉淀至 起始体积后，用BIODOT操作平台，按照8μl/cm的量喷涂至30×0.8cm的玻璃纤维膜上，25℃ 真空干燥1～2小时，放于干燥环境备用；

步骤(2)中所述磷酸盐缓冲液是包含5％蔗糖和0.05％吐温-20的磷酸盐缓冲液；

(3)组装试纸条：在5.5×30cm的PVC底板上依次搭接地粘贴：①滤纸和样本垫，样 本垫为一种经过处理的1×30cm的玻璃纤维膜，样本垫处理方法：用含5％蔗糖和0.01～5％ 吐温-20的0.01M pH7.4的磷酸缓冲液浸泡湿润后，放置37℃烘箱干燥2小时，放置于 干燥环境保存备用；②分散有荧光微球标记抗克伦特罗单抗的0.8×30cm的荧光微球垫； ③有克伦特罗人工抗原作为检测区和有抗鼠抗体作为质控区的2.5×30cm的硝酸纤维素 膜；④1.2×30cm的吸水纸；组装好后放入准备好的试纸条盒中，装入铝箔袋，加入干 燥剂后，封口保存，于室温干燥的环境保存备用。

2.一种按照权利要求1所述的制备方法制备的检测残留兽药的荧光微球免疫层析 试纸条。