[发明专利]一种融合基因以及基因工程菌及其制备和应用无效
| 申请号： | 200710157053.4 | 申请日： | 2007-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN101182529A | 公开（公告）日： | 2008-05-21 |
| 发明（设计）人： | 龚朝辉;龙香娥;乐燕萍 | 申请（专利权）人： | 宁波大学 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N1/21;C07K19/00;A61K39/00;A61K39/295;C12R1/19 |
| 代理公司： | 宁波海曙奥圣专利代理事务所 | 代理人： | 程晓明 |
| 地址： | 315211浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 融合 基因 以及 基因工程 及其 制备 应用 | ||
1.一种融合基因，其特征在于该融合基因由霍乱毒素B亚基和三拷贝谷氨酸脱羧酶抗原表位肽(gad 531-545)3融合而成，具有如序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。
2.一种含有权利要求1所述的融合基因的基因工程菌，其特征在于：为具有所述的融合基因与载体pGEX4T-1构建的重组质粒pGEX4T-CTB-(gad 531-545)3的大肠杆菌BL21。
3.一种制备权利要求2所述的基因工程菌的方法，其特征在于设计PCR引物扩增三拷贝谷氨酸脱羧酶抗原表位肽(gad 531-545)3的基因片断，与CTB基因的片段pBac-CTB质粒进行“三引物PCR”扩增反应，构建得到融合基因CTB-(gad 531-545)3，通过亚克隆入表达质粒pGEX4T-1中，构建成重组质粒pGEX4T-CTB-(gad 531-545)3，然后转化到宿主菌BL21中，制备得到所述的基因工程菌。
4.一种利用权利要求2所述的基因工程菌制备的融合蛋白，其特征在于由所述的融合基因编码表达，具有如序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。
5.如权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于所述的融合基因的霍乱毒素B亚基部分作为编码表达所述的融合蛋白的载体分子，三拷贝谷氨酸脱羧酶抗原表位肽部分作为编码表达所述的融合蛋白的活性部分。
6.如权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于所述的融合蛋白经Sepharose bead纯化后为具有生物学活性的融合蛋白。
7.一种利用权利要求6所述的融合蛋白制备的蛋白疫苗，其特征在于由所述的融合蛋白经冷冻干燥后，与药学认可的辅料配制成药学上认可的任一种药剂。
8.如权利要求7所述的蛋白疫苗，其特征在于所述的药剂为口服液。
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