[发明专利]重组人VIP－Humanin融合蛋白制备方法

权利要求书

1.一种重组人VIP-HN融合蛋白的制备方法，其特征在于，采用基因工程菌发酵法生产，而不是从天然存在的生物材料中制备。

2.如权利要求1所述的基因工程菌发酵法包括：a、重组人VIP-HN融合蛋白相关基因设计与合成，b、构建重组人VIP-HN融合蛋白表达载体，c、用所述表达载体转化宿主构建基因工程菌，d、利用所述基因工程菌发酵生产重组人VIP-HN融合蛋白。

3.如权利要求1或2所述的生产方法，所述相关基因结构为：

GGCGGATCCG ATGATGATGA CAAACATTCC GATGCGGTGT TTACCGATAA CTATACCCGC

CTGCGCAAAC AGATGGCGGT GAAAAAATAT CTGAACAGCA TTCTGAACCG CCGCGGCGGC

GCGGGCATTG TGGGCGGTAG CCGCAAAATG GCCCCGCGCG GCTTTAGCTG CCTGCTGCTG

CTGACCAGCG AAATTGATCT GCCGGTGAAA CGCCGCGCGT AAGAGCTC CG C(231)

4.如权利要求2所述的方法，其中发酵生产重组人VIP-HN融合蛋白的工艺流程如下：挑选单菌落基因工程菌，进行种子液和放大培养，诱导表达，下罐收集菌体进行细胞破碎，离心得包含体，破包含体及目标蛋白变性与复性，过Ni²⁺金属螯合柱获目标蛋白原，肠激酶解后再通过Ni²⁺金属螯合柱获得重组人VIP-HN融合蛋白，再脱盐及去杂，冷冻干燥样品，质检得最终样品。

5.如权利要求1，3所述的重组人VIP-HN融合蛋白，其是：

DDDDKHSDAV FTDNYTRIRK QMAVKKYLNS ILNRRGGAGI VGGSRKMAPR GFSCLLLLTS EIDLPVKRRA

6.如权利要求3所述的基因核苷酸顺序，以及在不改变其编码的氨基酸序列前提下所进行的碱基替换获取的基因。

7.如权利要求5所述的氨基酸顺序，以及在不改变其生物功能的前提下所进行的氨基酸替换获取的巨肽。

8.权利要求2所述的载体为商品化的pET28a(+)，及其替代品。

9.权利要求2所述的宿主细胞为商品化的BL21(DE3)，及其替代品。