[发明专利]与板栗疫病菌的DNA打靶效率相关的蛋白及其编码基因与应用

说明书

技术领域

本发明涉及与板栗疫病菌的DNA打靶效率相关的蛋白及其编码基因与应用。

背景技术

板栗疫病又称干枯病、胴枯病、溃疡病，是世界性病害。历史上曾在亚洲流行过，20世纪初曾使欧洲栗和美洲栗几遭覆灭。我国的陕西、河北、河南、山东、安徽、江苏、浙江、湖南、广东等省都有发生，局部地方发病率高达60％。病株生势衰弱，栗果产量、质量明显下降，严重的全株死亡，是我国对内外检疫对象之一。

板栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)是引起板栗疫病的病原真菌，属子囊菌亚门(Griffin G.1986.Chestnut blight and its control.Horticultural reviews.8：291-335.)。

要明确板栗疫病发病机制，首先要了解板栗疫病菌的基因功能，基因的功能决定了该菌的致病性、发病机制、耐药性等性状。

基因打靶是利用基因转移的方法，将外源基因引入细胞，通过外源基因与靶细胞染色体DNA序列间的重组，将外源基因定位整合入靶细胞染色体上的特定部位，使基因发生定位突变的技术。定位突变包括：基因缺失、基因置换、基因插入和点突变等。基因打靶使基因失活或使基因激活。其中，通过基因打靶使目标基因缺失或分裂失活，也称为基因敲除(gene knock-out)。

发明内容

本发明的目的是提供一种与板栗疫病菌的DNA打靶(如基因打靶)效率相关的蛋白及其编码基因。

本发明所提供的与板栗疫病菌的DNA打靶效率相关的蛋白，名称为CPKU80，来源于板栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)，是如下(a)或(b)的蛋白质：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列表中序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与板栗疫病菌的DNA打靶效率相关的由(a)衍生的蛋白质。

其中，序列表中的序列1由729个氨基酸残基组成。自氨基末端第4至166位氨基酸残基为Ku70/Ku80N-端结构域(vWA_ku)，自氨基末端第223至562位氨基酸残基为Ku-核心结构域(KU80)，自氨基末端第604至726位氨基酸残基为Ku C-端结构域(Ku_PK_bind)，与粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)MUS52(Ninomiya，Y.，K.Suzuki，C.Ishii and H.Inoue，2004Highly efficient gene replacements in Neurospora strains deficient fornonhomologous end-joining.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101：12248-12253.)在氨基酸水平上的一致性为47.0％，相似性64.0％。

所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加是指在序列1的上述三个结构域外进行取代和/或缺失和/或添加。

为了使(a)中的CPKU80便于纯化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的N端或C端连接上如表1所示的标签。

表1.标签的序列