[发明专利]一种DNA疫苗真核表达载体及其在制备基因疫苗中的应用

权利要求书

1、一种DNA疫苗真核表达载体，是在pVAX1载体骨架中添加内部核糖体进入位点编码序列得到的重组pVAX1真核表达载体。

2、根据权利要求1所述的DNA疫苗真核表达载体，其特征在于：在所述DNA疫苗真核表达载体中的内部核糖体进入位点编码序列的两端还添加有一种或多种稀有限制性内切酶识别位点；所述稀有限制性内切酶包括EcoR V、Cla I、BstB I、Pvu IPsi I、BssH II、Swa I、Pac I、Nsi I和Xho I。

3、根据权利要求2所述的DNA疫苗真核表达载体，其特征在于：所述DNA疫苗真核表达载体为pVAX1-IRES。

4、权利要求1-3任一项所述的DNA疫苗真核表达载体在制备基因疫苗中的应用。

5、根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述基因疫苗为抗肿瘤、抗流感、抗艾滋病、抗病毒性肝炎、抗结核、抗狂犬病或抗疟疾的基因疫苗。

6、根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述抗肿瘤基因疫苗的活性成分为在权利要求1-3任一项所述的DNA疫苗真核表达载体的载体骨架中核糖体进入位点编码序列的上游含有Survivin-2B自氨基端第5-28位和第80-121位氨基酸残基编码序列构成的融合基因，以及人和猴的绒毛膜促性腺激素β链的核心片段CTP37区域编码序列构成的融合基因的重组真核表达载体。

7、根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述Survivin-2B的自氨基端第5-28位氨基酸残基的编码序列和自氨基端第80-121位氨基酸残基的编码序列通过连接臂“nG”连接，其中，n为K、R、C、Q、G或N；所述人和猴的绒毛膜促性腺激素β链的核心片段CTP37区域编码序列通过连接臂“nG”连接，其中，n为K、R、C、Q、G或N。

8、根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述抗肿瘤基因疫苗的真核表达载体的载体骨架中内部核糖体进入位点编码序列的上游还连接有人Igκ链前导信号肽编码序列和/或人IgG-Fc段编码序列和/或糖基磷脂酰肌醇锚定信号肽编码序列。

9、根据权利要求6或7或8所述的应用，其特征在于：所述抗肿瘤基因疫苗的真核表达载体的载体骨架中内部核糖体进入位点编码序列的下游还连接有人GM-CSF和/或B7.1共刺激分子编码序列，以及白细胞介素、干扰素和/或肿瘤坏死因子的编码序列。

10、根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述含有Survivin-2B自氨基端第5-28位和第80-121位氨基酸残基编码序列构成的融合基因，以及人和猴绒毛膜促性腺激素β链的核心片段CTP37区域编码序列构成的融合基因的重组真核表达载体重组真核表达载体为pVAX1-2PAG或pVAX1-2PAG-Fc-GPI或pVAX1-2PFcGB。