[发明专利]一种治疗人乳头瘤病毒16型引发的肿瘤的多肽药物或疫苗

说明书

(一)、技术领域

本发明涉及一种生物医学领域，特别是一种关于人乳头瘤病毒16型引发的肿瘤的多肽药物或疫苗。

(二)、背景技术

人乳头瘤病毒的英文全称是human papilloma virus，简称HPV。

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，全球范围内，宫颈癌是女性癌症死因的第二杀手，每年新增约50万病例，其中有20％发生在中国。好发年龄呈双峰状，35～39岁和60～64岁。近年已明确，几乎所有的宫颈癌都由人乳头瘤病毒引起。其中，超过2/3的宫颈癌病例可归咎于两种类型的HPV：16型和18型。

发生宫颈癌的病因至今尚未完全明了，可能与性生活紊乱，过早性生活，早年分娩，多产，地理环境等因素有关。分子生物学研究结果显示90％以上的宫颈癌伴有HPV感染。宫颈癌以鳞状细胞癌最为多见，其次为腺癌和腺鳞癌等。高危型人乳头瘤病毒的感染是诱发宫颈癌的必要条件，几乎所有的宫颈鳞癌中都可以检测到HPV-DNA的存在。

目前治疗宫颈癌的只能采用手术、放疗，或两者联合使用。近年来，在上述方法基础上加免疫治疗受到重视并取得较好的效果。单独应用一种治疗方法的并发症发生率为3～11％，联合应用两种治疗方法的并发症发生率达到30％或以上。手术和放疗各有优缺点。目前的趋势是强调综合治疗，把手术、放疗和化疗进行有机的结合，以达到提高治疗效果、改善生活质量、减低并发症、尽可能保留生育功能和卵巢功能的目的。

综合治疗宫颈癌的方法，归纳起来有以下几种：

1)手术治疗法：切除标本的正常组织边缘距离肿瘤病灶最少达1cm以上。其缺点是损伤大，不能凭肉眼发现受HPV病毒感染的细胞，因此，被感染的细胞清除不彻底。

2)放射治疗法：放疗包括外照射和腔内放疗。适用于各期患者，常和手术、化疗配合使用。该方法主要缺点是：虽然能够杀死受HPV病毒感染的细胞，但是，射线对正常组织细胞损伤较大。

3)化学治疗法：化疗可用于术前、术后，或放疗前后，也常与放疗同时进行，以提高放疗的疗效。迄今为止，已报道有54种细胞毒药物用于进展或复发宫颈癌的化疗，单药化疗以顺铂的研究最广泛，疗效也最肯定。该方法主要缺点是：虽然能够杀死受HPV病毒感染的细胞，但是，化疗药物对正常组织细胞的毒性较大，出现诸如过敏性休克、呕吐、白细胞减少、抵抗力下降等副作用。

(三)、发明内容

本发明的目的就是提供一种治疗人乳头瘤病毒16型引发的肿瘤的多肽药物或疫苗，它可以专门针对受HPV16型病毒感染的细胞进行有效地破坏，而且对人体无毒副作用。

本发明的目的是通过这样的技术方案实现的，它的氨基酸序列为：氨基端-YICEDTSVTV-羧基端；以赖氨酸为接头，将多个该氨基酸序列组成多拷贝的串联结构。

正常人体的外周血单核细胞(简称PBMC)一般不具有特异性溶破受到HPV16型病毒感染的细胞的功能，本发明提供的多肽在体外与HLA-A*0201阳性人体的外周血单核细胞共同孵育，可以增加这些外周血单核细胞转化为细胞毒性T淋巴细胞(简称CTL)的数量50％-80％，还可以诱导激活CTL溶破HPV16型阳性的肿瘤细胞，溶破率为60％-90％。

本发明的基本的氨基酸序列来源于GENBANK报道的氨基酸序列，采用蛋白质表位分子设计的原理和方法，对HPV16型的E2蛋白序列进行CTL表位分析，主要是基于量化基序法确定E2蛋白的CTL表位，具体做法是：从E2蛋白第1位氨基酸残基开始，逐个截取九肽段或十肽段，共获得357条九肽段和356条十肽段。对于每一条肽段，在结合矩阵中查找各位点氨基酸残基的结合系数，这九肽或十肽结合系数相乘后再乘以标准系数，即为该九肽或十肽与HLA-A*0201的结合系数。最后，选取结合系数最高的几条肽段作为候选CTL表位。以此方法找到了具有功能的本发明所述的氨基酸序列，即：氨基端-YICEDTSVTV-羧基端。

合成本发明所述的氨基酸序列方法均是现有的成熟技术，它是按照如下的方法制成的：