[发明专利]男性Y染色体微缺失基因检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因缺失检测领域，尤其涉及一种男性Y染色体微缺失基因检测试剂盒及检测方法。

背景技术

全世界约有15％的夫妇被不育所困扰，其中男性因素约占一半。在排除输精管梗阻、克氏症和其他泌尿生殖系统原因后，严重少精症和无精子症最有可能的原因就是精子发生基因的异常。关于精子发生基因，特别关注Y染色体长臂11间隔。Y染色体构成人类基因组的2％，  由短臂(Yp)和长臂(Yq)组成。无精子症和严重少精子症的细胞遗传学和分子生物学研究也证实Y染色体上存在着无精子因子(azoospermia factor，AZF)，它有四个清楚的、非重叠的亚区，即AZFa、AZFb、AZFc和AZFd区。这些区域的基因微缺失可引起精子发生障碍，继而引起男性不育。因此Y染色体微缺失现在被认为是男性特发性不育最重要的遗传学病因。随着辅助生殖技术的进展，卵细胞胞浆内精子注射(intracytoplasmic sperm injection，ICSI)技术被认为是男性不育症治疗上的一次革命。然而该技术可能将携带染色体畸形、缺失或基因突变的精子注入到卵胞浆内，使卵子受精，从而将上述各种遗传缺陷传给下一代。因此，为了确定是否需要治疗，临床医生建议所以精子浓度＜5×10⁶/mL的男性都要进行Y染色体微缺失的分子诊断。

AZF的片段较小，常规核型分析不易发现其缺失，故一般通过对STSs进行PCR扩增来获取Y染色体微缺失信息。常用的技术有：

1.多重PCR电泳：多重PCR是目前Y染色体微缺失检测应用得最广泛的方法，具有简单、快速、灵敏、特异、经济和高通量的特点，是检测AZF的理想方法，但与常规PCR相比有更高的技术要求，且缺少标准筛查方案，各实验室结果不尽相同。

2.探针技术：用特异探针进行Southern blot或Northern blot是研究AZF微缺失与男性不育关系的有效方法，但方法过于繁琐，难以推广，多用于实验室研究。

3.其他：(1)基因芯片技术：个别报道用基因芯片技术同时对多个热点基因进行研究，有助于筛选和研究无精子症相关基因，详尽了解无精子症的发病机制。(2)毛细管电泳技术：具有高通量、高灵敏度、快速及进样量少的优点，但需要专门的毛细管电泳仪。

中国专利200410043918.0公开了特异性扩增Y染色体上微缺失STS中的sY87和sY143的两对引物序列，但作为Y染色体微缺失检测方法，不符合欧洲生殖学会检测至少6个STS(sY254、sY255、sY84、sY86、sY127、sY134)的最低要求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种男性Y染色体微缺失基因检测试剂盒，该试剂盒能稳定、高效地对男性Y染色体微缺失基因进行检测。

本发明的另一个目的在于提供一种男性Y染色体微缺失基因检测方法，该方法建立在多重PCR和凝胶电泳基础上，提高了多重PCR的稳定性和均一性。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种男性Y染色体微缺失基因检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括：

特异性扩增Y染色体AZFa亚区sY82序列的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26所示；

特异性扩增Y染色体AZFa亚区sY84序列的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示；

特异性扩增Y染色体AZFa亚区sY86序列的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示；

特异性扩增Y染色体AZFb亚区sY124序列的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22所示；

特异性扩增Y染色体AZFb亚区sY127序列的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18所示；

特异性扩增Y染色体AZFb亚区sY128序列的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：27和SEQ ID NO：28所示；

特异性扩增Y染色体AZFb亚区sY133序列的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：29和SEQ ID NO：30所示；

特异性扩增Y染色体AZFb亚区sY134序列的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24所示；

特异性扩增Y染色体AZFb亚区sY143序列的引物，其碱基序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；