[发明专利]从丹参水提取液中一步分离纯化丹酚酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然植物功效成分提取技术，特别是一种从丹参水提取液中一步分离纯化丹酚酸的方法，具体涉及从丹参水提取液中简便、高效、快速地分离纯化多种丹酚酸的方法。

背景技术

丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)是一种多年生草本植物，为唇形科鼠尾草属，其干燥根是中医常用的一味历史悠久的活血化瘀药，具有“行气止痛，宁心安神，清热凉血，活血化瘀，养血益气，祛痹健脚，调经止崩，解毒排脓”八大功效。

丹参的水溶性成分具有广泛的药理作用，如保护心肌缺血缺氧、改善微循环、中枢镇静、抑制血小板聚集和血栓形成等，临床上已将其用于冠心病、心绞痛、心肌梗塞、缺血性中风等疾病的治疗，药效显著。其中几种重要化合物又有其特殊的功效，如：丹参素能显著扩张冠状动脉，增加血流量，提高心肌和脑组织中ATP含量，因而在缺血或缺氧情况下，能明显缩小心肌梗死范围；原儿茶醛的作用药理与丹参素相似，也具有扩张冠状动脉作用，是丹参保护心血管系统的有效成分，而且能预防肿瘤坏死因子-α(TNF-α)导致的血管壁细胞粘连；丹酚酸A能有效降低血清中丙氨酸转氨酶及TNF-α的浓度；迷迭香酸能抑制炎症分子的表达和HIV-1整合酶的活性；紫草酸是一种多靶点的抗HIV化合物；对大鼠肝脏体内和体外研究表明丹酚酸B镁盐可以对抗D-半乳糖胺引起的大鼠肝损伤，减少肝细胞坏死程度。因此，如能同时获得多种纯度较高的丹酚酸组分，则可最大限度地开发丹参的药用价值。

目前，丹参水溶性成分的获取多采用水提醇沉、乙酸乙酯萃取等方法，文献(中成药，2007，29(1)：143-144；中草药，2007，38(6)：843-846；中草药，2007，38(4)：542-545；时珍国医国药，2007，18(5)：1186-1187)均有详细阐述，但所得产品或为多酚酸混合物，构效关系并不明晰；或再经过多步纯化得到某一单一药效物质，如CN1342638A采用水提-双柱吸附洗脱-溶剂萃取等步骤纯化丹参素、CN1303052C采用水或醇提-前体转化-超滤除杂-溶剂萃取-正相色谱等多步纯化丹参素、CN1751706A采用碱提-酸化-醇沉-双柱(树脂+聚酰胺)吸附洗脱-结晶等多步纯化丹参素、CN101012163A采用树脂吸附洗脱-重结晶或二次层析纯化丹参素、CN1425659采用水提-酸化-柱层析-干燥等数步分离纯化丹酚酸B，上述各例中均以单一组分为提取纯化目标，其他功效成分未涉及。CN1305866C采用两次沸水提取-高速离心-膜滤除杂或溶剂萃取-反相色谱分离等多步得到丹酚酸A、B和原儿茶醛三种组分，但纯度和收率等参数未报道，且为分批处理，每次上样5ml。因此，目前尚无一种操作简便，提取效率和产品纯度与处理量均较高，并可同时分离纯化多种丹酚酸的方法。

发明内容

本发明目的在于提供一种从丹参水提取液中一步分离纯化多种丹酚酸的方法，该方法操作简便，可以一步分离纯化制备出5种丹酚酸。

本发明提供的一种从丹参水提液中分离纯化丹酚酸的方法包括以下步骤：

1)取丹参药材，粉碎，用水溶液提取；

2)提取液中酸化调pH值，并且加盐进行后处理；

3)处理后的提取液，在填充了吸附剂的层析柱上进行动态连续吸附、洗脱：先以水洗脱，收集洗脱液，浓缩；再以梯度乙醇溶液洗脱，分段收集洗脱液，浓缩；浓缩液干燥即得产品。

本发明提供一种从丹参水提取液中一步分离纯化多种丹酚酸的方法主要包括以下步骤：

1)取丹参药材，粉碎，用水溶液提取；

2)提取液加酸调节pH值，以去除絮状物；加盐以增强树脂对物质的吸附能力；

3)处理后的提取液在填充了吸附剂的层析柱上进行动态连续吸附、洗脱：先以水洗脱，收集洗脱液，浓缩；再以梯度乙醇溶液洗脱，分段收集洗脱液，浓缩；浓缩液干燥即得产品。

步骤1)采用水提丹参中的水溶性成分，得到包含多种丹酚酸的总酚酸提取液。所述提取方法为浸渍法、渗漉法、微波萃取法、超声法或酶法提取中的一种，优选酶法提取(CN1884558)，提取液可经过醇沉或不经醇沉处理，以产品收率为考核指标时，优选不经过醇沉的提取液。

步骤2)中所述的酸选自：盐酸、硫酸、硝酸、甲酸、乙酸或高氯酸中的一种或一种以上等，优选盐酸，浓度为1～4％；pH值范围为1～5，优选pH＝3.5；采用离心或抽滤法去除提取液中的絮状物，优选离心法，转速为5500转/分钟；所述的盐为下列一种或者一种以上组合：氯化钠、硫酸钠、硫酸铵等，优选氯化钠。