[发明专利]一种从桔梗中制备桔梗皂苷D的方法及其在抗癌药物中的应用

说明书

一、技术领域

本发明设计一种抗癌药物及其制备方法，具体地说是以传统中药桔梗为原料提取的一种抗癌活性物质五环三萜类化合物及其制备方法。

二、背景技术

癌症是威胁人类健康的三大顽疾之一。世界上每年因癌症死去的人数达千万人，治疗癌症对于人类发展来说已经迫在眉睫。植物药近年来发展方兴未艾，从植物中发现的很多有效成分具有抗癌活性，因其副作用小，抗癌效果好而日益受到人们的重视。

本发明人系统的研究了中药桔梗的皂苷类化合物，经动物实验表明桔梗皂苷类化合物对癌细胞有显著的抗癌效果。在上述基础之上，本发明人又从桔梗总皂苷中分离得到活性强的抗癌单体化合物，即活性成分。

三、发明内容

1、发明目的：本发明的目的是提供一种高效低毒，抗癌效果显著的单体化合物及其制备方法，具体地说是以传统中药桔梗为原料提取的一种五环三萜皂苷类化合物及其在制备治疗肝癌和胃癌药物方面的应用。

2、技术方案：本发明人在现有技术的基础上又作了进一步的研究，发现桔梗皂苷D为桔梗皂苷类化学成分中具有较强抗癌活性的单体化合物。并经查阅中外文文献，未发现有报道桔梗皂苷D用于肝癌和胃癌等癌症的治疗。本发明从桔梗中提取的一种五环三萜化合物，它是3-O-β-D-glucopyranosyl-2β，3β，16α，23，24-pentahydroxyolean-12-ene-28-oic acid 28-O-β-D-apiofuranosyl-(1→3)-β-D-xylopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-α-L-arabinopyranosyl ester，分子式为C₅₇H₉₂O₂₈，其化学结构如下：

一种从桔梗中制备桔梗皂苷D的制备方法，其步骤是：

A、将桔梗生药粉碎后用5000mL的70％乙醇超声波提取，回收乙醇然后将提取液浓缩得浸膏。

B、浸膏用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇分别提取，得正丁醇提取液。

C、将正丁醇层过NKA-12柱色谱，以水和5000mL的70％乙醇洗脱，回收乙醇，得到提取物。

D、将C步骤中所得到得提取物再进行硅胶(300-400目)柱层析，用3500mL氯仿-甲醇(10∶3)淋洗，得到在薄层板上斑点最大的化合物即为本发明的桔梗皂苷D，它可以用半制备高效液相色谱纯化。

本发明涉及一种五环三萜化合物桔梗皂苷D在制备肝癌的药物方面的应用

采用MTT法测定桔梗中五环三萜化合物桔梗皂苷D对肝癌细胞生长抑制作用。选用对数生长期的贴壁肝癌细胞，用胰酶消化后，再用含10％小牛血清RPMI1640的培养基配成所需浓度的细胞悬液，接种在96孔培养板中，每孔接种100μL，在37℃的5％CO₂孵箱中培养24h。实验组换新的含不同浓度被测样品的培养基，对照组则换含等体积溶剂的培养基，每组设3个平行孔，另设药液对照孔，在37℃的5％CO₂孵箱中培养82h。弃去上清液，每孔加入100μL无血清的培养基和10ul5mg/mL的MTT，在上述条件下培养4h，小心弃上清液，并加入100μlDMSO溶解MTT沉淀，用微型振荡器混匀后，在酶标仪上经波长为540nm测定光密度值。抑制率％＝(1-实验组光密度值/对照组光密度值)×100％。

实验结果表明，随着桔梗中五环三萜化合物桔梗皂苷D浓度的升高，对肝癌细胞生长抑制率也升高，五环三萜化合物桔梗皂苷D在20μg/mL以上时对肝癌肝癌细胞生长有明显的抑制作用，其中20μg/ml时抑制率最高，其抑制率达87.39％。

本发明涉及一种五环三萜化合物桔梗皂苷D在制备胃癌的药物方面的应用