[发明专利]一种测定人血浆中抗病毒药物浓度的方法

说明书

技术领域

本发明属医学检验领域，涉及体内药物的分析测定方法，具体涉及一种测定人血浆中抗病毒药物浓度的方法。

背景技术

目前，临床用于治疗病毒性疾病的抗病毒药物若干，阿昔洛韦(Acyclovir，ACV)、更昔洛韦(Ganciclovir，GCV)和喷昔洛韦(Penciclovir，PCV)是目前临床上常用的核苷类抗病毒药物。其中ACV与GCV是最重要的抗巨细胞病毒药物。PCV主要对I、II型单纯疱疹病毒、水痘带状疱疹病毒和乙型肝炎病毒等具有强效抑制作用。当PCV与ACV或GCV合用，临床疗效明显增强。由于三种药物的药动学个体间差异大、合并用药普遍、肝肾功能异常会导致药物血浆浓度和药效变化，因此通过检测血浆中上述药物的浓度来调整给药剂量，对保证用药的安全和有效有重要的临床意义。

目前医学检验中，国内有分别测定人血浆中有关抗病毒药物浓度的方法的报道，但所述方法存在灵敏度低、操作繁琐费时、效率低、分析成本高等种种缺陷，不适合常规治疗药物浓度监测；国外尚未见相关的同时测定人血浆中ACV、GCV和PCV的浓度的报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种简便、快速、灵敏、可同时测定体内阿昔洛韦(Acyclovir，ACV)、更昔洛韦(Ganciclovir，GCV)和喷昔洛韦(Penciclovir，PCV)的血药浓度的方法。

本方法无需昂贵的设备和试剂，具有操作简便、快速、血浆用量少、成本低等优点，适合常规血药浓度监测。

本发明方法的技术方案是：待测样品预处理后，经酸性流动相在色谱柱分离，用荧光检测器检测，包括下述步骤：

1)样品预处理

取待测样品，加入定量的蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀、离心、取上清液进样，

所述的蛋白沉淀剂为7～20％的高氯酸溶液；

2)样品分离

采用通用型的液相色谱柱，其填料为Diamonsil C₁₈，高效液相系统采用通用型高压泵和进样器，采用0.08～0.1％三氟乙酸(TFA)水溶液(pH＝2.1～2.5)和甲醇的混合液作为流动相，梯度洗脱；

梯度洗脱模式优选0～7min为0.08～0.1％TFA水溶液-甲醇(96∶4，V/V)，7.01～10.0min为0.08～0.1％TFA水溶液-甲醇(40∶60，V/V)，10.01～12.5min为0.08～0.1％TFA水溶液-甲醇(96∶4，V/V)；

3)样品检测

采用通用型荧光检测器检测ACV、GCV和PCV的峰面积，荧光激发波长为260±1nm，发射波长为380±1nm，用标准曲线方程换算成浓度。

本方法具有以下优点：

1.采样量少：测定一份样品只需0.2ml血浆样本；

2.预处理简便：一步高氯酸溶液蛋白沉淀，简便易行，适用于常规检测；

3.灵敏度高：根据ACV、GCV和PCV在酸性条件下具有强荧光吸收的特性，采用酸性流动相和荧光检测，明显提高检测灵敏度，ACV、GCV和PCV的最低定量限均为20μg·L^-1，显著优于现有技术公开的GCV 100μg·L^-1、ACV100μg·L^-1和PCV的40μg·L^-1；

测定时间短：整个色谱分析测定过程为12.5min。

本方法所述的ACV、GCV和PCV测定的线性范围均为20～2000μg·L^-1，方法回收率均大于91％，日内和日间的精密度(相对标准差，RSD)均小于8％。本发明方法快速准确、操作简便、灵敏度高、成本低，适合临床常规监测。

附图说明

图1：典型色谱图：

其中，A：未服用阿昔洛韦、更昔洛韦和喷昔洛韦受试者的空白血浆；B：空白血浆+阿昔洛韦、更昔洛韦和喷昔洛韦标准品(阿昔洛韦、更昔洛韦和喷昔洛韦三者的浓度均为20μg·L^-1)；

1：内标(鸟苷酸)；2：更昔洛韦；3：阿昔洛韦；4：喷昔洛韦。

图2：服用阿昔洛韦、更昔洛韦和喷昔洛韦受试者的色谱图，

其中，1：内标(鸟苷酸)；2：更昔洛韦(浓度为692.6μg·L^-1)；3：阿昔洛韦(浓度为760.3μg·L^-1)；4：喷昔洛韦(浓度为910.5μg·L^-1)。