[发明专利]以链亲和素为载体的短肽融合表达热诱导重组质粒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，更具体地涉及采用链亲和素(Stv)核心蛋白作为目的短肽(6-20肽，如8肽或18肽)生物合成载体，可专供抗原表位扫描鉴定用的原核生物热诱导Stv重组表达质粒(如pXXStv-1和pXXStv-2)及其制备方法。

背景技术

众所周知，就探究一个新蛋白的功能，特别是研制靶抗原合成肽疫苗而言，扫描鉴定它的线性B-细胞表位(B-cell epitope，BCE)始终是非常重要的研究内容。

最早最经典的抗原表位鉴定方法是始于1963年的固相肽化学合成法，但这一技术过于繁琐，一直未能获得广泛应用。八十年代中先后发展了聚苯乙烯针(polypropylene pin)多肽合成技术(Gensen HM，et al.：Use of peptide synthesis toprobe viral antigens for epitopes to a resolution of a single acid.Proc Natl Acad SciUSA，81：3998-4002，1984)和聚苯乙烯网袋(polypropylene mesh bag)合成技术(Houghten RA.：General method for the the rapid solid-phase synthesis of largenumbers of peptides：Specificith of antigen-antibody interaction at the level ofindividual amino acids.Proc Natl Acad Sci USA，82：5131-5135，1985)，从而促进了连续且部分重叠的肽探针BCE扫描法的应用。这二项重要技术的特点是针洗涤完全，可反复使用，而且能直接转入酶标板中进行ELISA检测，或大大简化肽合成过程，因而在抗原表位扫描鉴定中相对应用较多。但由于氨基酸残基合成费用高，检测技术要求高且需要特殊仪器设备，因而限制了其广泛应用。随着分子生物学技术的进步，八十年代中期也建立了基因亚克隆表位鉴定法(Mehra V，et al.：Efficient mapping of protein antigenic determinants.Proc NatlAcad Sci USA，83：7013-7017，1986)。该方法的要点是：将靶基因用DNA酶随机切割成200～1,000碱基大小不等的片段，并将它们亚克隆重组插入λgt11表达载体，然后用特异的单抗筛选免疫反应阳性的克隆，并进行DNA测序，最后依据那些插入片段共有的核苷酸序列推断出该单抗识别的BCE基序。因为酶切条件不易控制，或者说不易获得足以比较推断的BCE基序的不同长度片段亚克隆，所以应用该方法成功鉴定出靶BCE的报道屈指可数。

至于表位扫描鉴定原理与化学合成肽法和基因亚克隆法相似的化学合成肽库法(Jung G and Beck-Sickinger AG：Multiple peptide synthesis methodsand their applications.Angew Chem Int Ed Engl，31：367-486，1992；GeysenHM and Mason TJ：Screening chemically synthesized peptide libraries forbiologically-relevant molecules.Bioorg Med Chem Lett.3：397-404，1993)和基因工程肽库法或称噬菌体表位展示文库法(Scott JK and Smith GP：Searching for peptide ligands with an epitope library.Science，249：386-390，1990)，很显然，它们的应用也存在很大的局限性，因为建库工作量大和表位筛选麻烦，特别是建库成本高，常规实验室的靶抗原表位扫描鉴定不适宜采用此类方法，除非所需筛选鉴定的抗原特别重要特别有意义。