[发明专利]一种蟾酥提取物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种蟾酥提取物及其制备方法，该蟾酥提取物的主要成分为脂蟾毒配基、华蟾毒精和蟾毒灵这三种蟾毒配基混合物。

背景技术

药用蟾蜍为两栖纲蟾蜍科动物中华大蟾蜍(Bufo bufogargarizans Cantor)或黑眶蟾蜍(Bufo melanostictus Schneider)。蟾酥为中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的耳后腺及皮肤腺分泌的白色浆液，经加工干燥制成。古今验方广泛应用蟾蜍、蟾酥拔毒消肿、定痛杀虫、强心利尿。经现代科学研究，发现蟾酥中的脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵三种脂溶性成分的混合物不但具有明显的抗肿瘤作用，而且还能将肿瘤细胞转化为正常细胞(诱导肿瘤细胞分化)、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞新生血管形成、降低肿瘤转移等作用。

中国专利申请“蟾蜍或蟾酥中三种抗癌化合物的制剂及其制备方法”(申请号：200610045893.7，公开号为1810827A)使用乙醇、丙酮等有机溶剂提取，提取物经硅胶、氧化铝等色谱柱分离，并以不同比例石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇等溶剂梯度洗脱的方法分别得到脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵三种脂溶性成分，合并取得此三种蟾毒配基混合物，其总含量高于80％。但其中许多条件如溶剂的浓度、样品上样方法及洗脱剂的具体比例等都尚未公开，且梯度洗脱操作复杂、费时。此外，从安全性和疗效的角度考虑，三种脂溶性成分的总含量有待进一步提高。

发明内容

本发明要解决的技术问题即是提供一种脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵三种蟾毒配基混合物含量超过90％的蟾酥提取物及其制备方法。

本发明人经过试验惊奇地发现，采用无水乙醇为提取溶剂；并且采用一定比例的石油醚和丙酮等度洗脱，不仅提取效率高，简化了步骤，还进一步提高了上述三种蟾毒配基混合物含量，可以达到90％水平以上。

本发明提供的一种蟾酥提取物的制备方法，其包括下列步骤：

①将蟾酥药材用无水乙醇回流提取；

②将上述提取液浓缩后经硅胶柱分离，用体积比为3～10:1的石油醚和丙酮等度洗脱，收集洗脱液，过滤，蒸干即得含有三种蟾毒配基混合物的蟾酥提取物。

较佳地，为增加提取效率及节约提取溶剂，步骤①中所述的蟾酥药材通常先研磨粉碎成粉(过60目筛)；而综合考虑提取效果及所需的成本、时间，每次提取时药材与无水乙醇的比例优选1g:5～20ml，更优选1g:10～12.5ml；每次提取时间优选20～60分钟，一般在40分钟左右；共提取1～3次。

较佳地，为增大上样量，易于工业化生产，步骤②中将浓缩的提取液加入硅胶拌样，蒸干得拌样硅胶，所得拌样硅胶干法上样。其中，加入硅胶的量以能完全吸附蟾酥提取物浓缩液为宜，优选为最初称取的蟾酥药材重量的0.5～3倍左右，更优选0.6～1倍。

更佳地，为达到更好的纯化效果，在所得拌样硅胶干法上样前先将硅胶湿法装柱，预先用所述洗脱剂石油醚和丙酮浸泡洗脱。

本发明步骤②中洗脱剂石油醚和丙酮的更佳体积比为4～6:1。

本发明优选的硅胶为100～160目的粗孔硅胶。

采用本发明上述制备方法制得的蟾酥提取物中脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵这三种蟾毒配基混合物的重量百分比含量均在90％以上，通常在91～99％范围。

本发明与现有技术相比，其优点在于采用绿色安全的乙醇溶剂提取，采用上样量较大的干法上样，使用等度洗脱，简化了纯化方法，进一步提高了三种脂溶性成分的总含量，达到高于90％水平。并且，本发明提取纯化方法及所用设备简单，成本较低，操作简便，耗时较短，易于工业化生产，三种脂溶性成分可以得到较好的纯化，纯化效率高，纯化纯度大幅提高，减小了药物的毒副作用，可以提高药物的安全有效性。

附图说明

图1为本发明蟾酥提取物经纯化后的HPLC色谱图。

具体实施方式

下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。

实施例1

取蟾酥药材1克，加无水乙醇10ml，加热回流40min，上述条件下提2次。将提取液趁热过滤，旋蒸浓缩后加入0.9克硅胶拌样，得拌样硅胶。取20克硅胶以石油醚：丙酮(体积比5：1)浸泡后湿法装柱，加入拌样硅胶，用石油醚：丙酮(体积比5：1)洗脱剂进行等度洗脱。通过HPLC鉴别(如图1所示，保留时间为7.184min的为蟾毒灵，8.886min的为华蟾毒精，9.549min的为脂蟾毒配基)，收集含有这三种脂溶性成分的洗脱液，蒸干，即得本发明蟾酥提取物，其中三种蟾毒配基混合物占整个提取物的重量百分比为98.01％。