[发明专利]氨基酸浓度的测定方法及氨基酸诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医药、食品、环境等领域内对氨基酸浓度的检测，尤其涉及酶比色法及偶联法测定氨基酸浓度的方法，以及由此制得的氨基酸诊断试剂盒，属于氨基酸浓度分析检测技术领域。

背景技术

氨基酸含量的测定在医学/食品/工业/农业/环境中都是比较重要的测定项目。现有的测定方法有色谱法、电化学法、仪器分析法(氨基酸分析仪)、分光光度计等方法，操作较为繁杂、特异性差、仪器设备成本较高。

氨基酸不是单纯的一种物质，用氨基酸分析仪可直接测定出17种氨基酸(仪器价格昂贵，不能普遍使用)，对于医学/食品/工业/农业/环境中来说，多数情况下，都是很多种氨基酸同时存在，所以需要测定总的氨基酸含量，它们不能以氨基酸百分率来表示，只能以氨基酸中所含的氮(氨基酸氮)的百分率表示。

大量食肉或饥饿时尿中氨基酸氮增加，孕妇及新生儿尿液氨基酸氮也增加。氨基酸代谢异常，造成某些氨基酸在体内积累过多，使尿中氨基酸氮增高；急性肝萎缩、肝功能衰竭、Reye综合征、或某些因素造成蛋白质分解加速的疾病，遗传性疾病所导致的代谢异常均可使尿中氨基酸氮增加。

酶法测定血、尿、体液、食品、土壤、工业产品中氨基酸氮含量具有特异性高、方法简便、成本低的特点。

发明内容

本发明的目的是提供一种测定氨基酸浓度的方法，以及应用该方法配制而成的氨基酸诊断试剂盒。

为实现本发明的目的，一种酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)及偶联法(Couple Reaction)测定氨基酸浓度的方法，利用氨基酸氧化酶为作用酶、NADH过氧化物酶为显色酶，对待测样品中的氨基酸进行检测，采用以下步骤进行：

将测定的样品与含有氨基酸氧化酶、氧、还原型辅酶、NADH过氧化物酶的试剂混匀，使之发生以下反应，

将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度下降的程度/速度，测算出氨基酸浓度的大小。

上述酶比色法及偶联法测定氨基酸浓度的方法中，所述还原型辅酶是NADH、NADPH、thio-NADH或thio-NADPH中的一种。

实现本发明氨基酸诊断试剂盒可以是单剂，由以下成分组成：

缓冲液          20～500mmol/L，

稳定剂          1～4000mmol/L，

还原型辅酶      0.1～0.35mmol/L，

氨基酸氧化酶    1000～80000U/L，

NADH过氧化物酶  1000～80000U/L。

试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

也可以将以上单剂中的各种成分进行组合配制成双剂，比如：

双剂的配方不仅仅限于上述表中所列，其中试剂I的成分：还原型辅酶，可以放在试剂II；试剂II中的氨基酸氧化酶、NADH过氧化物酶也可以放到试剂I，如此可以形成多种配方，不再一一列举。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

此外，以上单剂、双剂的试剂I/试剂II当中通常加入稳定剂，浓度在1～4000 mmol/L、或0.1％～100％体积比范围之内。

还可以将试剂配成如下三试剂：