[发明专利]使用抗衰老化合物生产蛋白质的方法

权利要求书

1.在细胞培养物中生产蛋白质的方法，其包括步骤：

在包含抗衰老化合物的细胞培养基中培养经遗传修饰以表达或以诱导 或增强表达编码目的蛋白质的基因的哺乳动物细胞，其中所述基因在细胞 培养条件下表达；和

在条件下维持培养并维持足以允许蛋白质表达的时间；

其中所述的细胞培养物呈现改善的细胞培养特性，所述细胞培养特性 不同于缺少抗衰老化合物但其它方面相同的条件下在其它方面相同的培养 基中观察到的相应的细胞培养特性；并且其中抗衰老化合物选自肌肽、乙 酰肌肽、高肌肽、鹅肌肽、和它们的组合；

其中所述的改善的培养特性选自增加的滴度、增加的细胞比产量、增 加的细胞生存力、减少的高分子量聚集体累积、减少的酸性物质累积及其 组合。

2.权利要求1的方法，其中抗衰老化合物包含肌肽。

3.权利要求1或2的方法，其中抗衰老化合物以大约5mM至大约 100mM之间的浓度存在于细胞培养基中。

4.权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中向所述细胞培养物进一 步提供补充组分。

5.权利要求4的方法，其中所述的补充组分在补料培养基中提供。

6.权利要求4或5的方法，其中所述的补充组分选自激素和/或其它 生长因子、选自钠、氯化物、钙、镁和磷酸盐的特定离子、缓冲剂、维生 素、核苷或核苷酸、微量元素、氨基酸、脂类、葡萄糖或丙酮酸、丙酮酸 盐、及它们的组合。

7.权利要求4、5或6的方法，其中所述的补充组分包括抗衰老化合 物。

8.生产蛋白质的方法，其包括步骤：

在细胞培养基中培养经遗传修饰以表达或以诱导或增强表达编码目的 蛋白质的基因的哺乳动物细胞，在利于生长期细胞生长的第一个温度或温 度范围进行所述培养，其中所述基因在细胞培养条件下表达；

将细胞培养基的温度或温度范围改变为利于蛋白质生产的第二个温度 或温度范围；

在第二个温度或温度范围于细胞培养基中将宿主细胞培养通过转换期 并进入生产期；

其中向细胞培养物中加入抗衰老化合物，并因此使细胞培养物呈现改 善的细胞培养特性，所述细胞培养特性不同于缺少抗衰老化合物但其它方 面相同的条件下在其它方面相同的培养基中观察到的相应的细胞培养特 性；并且其中抗衰老化合物选自肌肽、乙酰肌肽、高肌肽、鹅肌肽、和它 们的组合；

其中所述的改善的细胞培养特性选自增加的滴度、增加的细胞比产量、 增加的细胞生存力、减少的高分子量聚集体累积、减少的酸性物质累积及 其组合。

9.权利要求8的方法，其中在细胞培养过程开始时向细胞培养基中加 入抗衰老化合物。

10.权利要求8或9的方法，其中在生长期期间向细胞培养基中加入 抗衰老化合物。

11.权利要求8、9或10的方法，其中在转换期期间向细胞培养基中 加入抗衰老化合物。

12.权利要求8-11中任意一项所述的方法，其中在生产期期间向细胞 培养基中加入抗衰老化合物。

13.权利要求8的方法，其中所述的抗衰老化合物包含肌肽。

14.权利要求8-13中任意一项所述的方法，其中所述的抗衰老化合物 以大约5mM至大约100mM之间的浓度存在于细胞培养基中。

15.权利要求14的方法，其中向所述细胞培养物中进一步提供补充组 分。

16.权利要求15的方法，其中所述的补充组分在补料培养基中提供。

17.权利要求15或16的方法，其中所述的补充组分选自激素和/或其 它生长因子、选自钠、氯化物、钙、镁和磷酸盐的特定离子、缓冲剂、维 生素、核苷或核苷酸、微量元素、氨基酸、脂类、葡萄糖或丙酮酸、丙酮 酸盐、及它们的组合。