[发明专利]用于阻断血小板和细胞粘附、细胞迁移和炎症的方法和组合物

说明书

交叉引用

本申请涉及并要求享有2005年9月28日提交的美国临时申请60/721,754的优先权，在此完整引入作为参考。

发明背景

损伤应答是一种用于恢复组织完整性的固有的宿主免疫应答。伤口愈合，不管是由外伤、手术、微生物或者外源材料启动，都是通过事件的交叠模式进行，包括凝结、炎症、上皮形成、肉芽组织的形成、基质和组织重塑。修复过程在很大程度上受相互作用的分子信号调节，包括激发和协调多种细胞活性的细胞因子，所述细胞活性重点涉及炎症和愈合。

初始损伤引发凝结作用和急性局部炎性应答，继之以间质细胞募集、增殖和基质合成。无法解决炎症可能导致慢性不愈合创口，而基质不受控制的积聚经常涉及异常细胞因子途径，导致过量的疤痕和纤维化结果。

大多数类型的损伤损害血管，而凝结是起动止血作用和防止宿主过度失血的应答。血管壁损伤将胶原暴露于流动血液中的成分。胶原是凝血酶原表面组分，其已经被证明是血小板粘附、聚集及其颗粒释放的刺激剂，导致其他血小板被募集到该区域形成凝聚物或者血栓(Ruggeri，Z.M.等人；Seminars in Hematology，1994，31，229-39)。血小板与血管表面的初次接触受胶原结合的von Willebrand因子(vWF)和血小板上特异性vWF受体--糖蛋白Ib-V-IX复合物的介导。这种可逆的粘附使得血小板翻转到受损区域，然后继之以胶原受体(α(2)β(1)，GPVI)介导的坚固粘附，进一步导致血小板活化。这导致血小板α(IIb)β3受体的构象活化、纤维蛋白原结合和最终的血小板凝集。此外ADP、肾上腺素和循环凝结因子驱动血小板的其它激活过程，而同时凝血酶活性的增加有助于交联的纤维蛋白凝块的形成。血小板-血小板凝集支持该过程，并被作为调节物的纤维蛋白原驱动，所述纤维蛋白原通过糖蛋白IIb/IIIa受体桥接细胞。

这种正常的生理反应在病理过程中起作用，所述病理过程中血小板与巩膜损伤所暴露的胶原粘附(Van der Rest M.等人；FASEB Journal，1991，5，2814-23)并启始建立阻塞。根据阻塞的位置和程度，并发症例如心肌梗死、中风、炎症或者肺栓塞可能是该过程的结果。

作为一个直接作用的抗血栓剂，肝素阻断凝血酶活性从而阻止富含纤维蛋白的血栓形成，在当前被用于抗血栓介入。肝素在下列适应症中使用，例如：不稳定心绞痛和急性心肌梗塞。但是，肝素的若干缺点仍未得到解决，例如静脉应用，需要抗凝血酶-III作为辅因子，对于凝块结合的凝血酶的亲合力降低，被若干种血浆蛋白灭活，间或诱导血小板减少和它的生物学异质性。

近来开发的低分子量肝素提供了皮下应用的形式；但是相对于标准肝素，治疗效益一般。令人遗憾的是，相同情况也适用于直接作用的其它抗凝血酶，例如水蛭素，水蛭肽和华法林。问题之一似乎涉及抗血栓治疗中凝血酶产生的增加(Rao，A.K等人，Circulation，1996，94，389-2395)。

因此近来其他策略集中于因子Xa驱动的凝血酶原活化过程。挑战是设计合适的针对该因子的抑制剂。

另一类治疗表示为溶栓疗法，集中在葡激酶、链激酶、尿激酶型纤溶酶原激活剂、组织型纤溶酶原激活剂和茴香酰化-纤溶酶原-链激酶激活剂复合物。诱导再灌注所需的时间差异对于这些溶血剂中的每一种是不同的，但是从降低总死亡率来说，所有产品的贡献是相同的。此外，再阻塞和/或延长出血是并发症中的一部分。这可能是由于对纤维蛋白的特异性相对较低以及这些化合物的血浆半衰期短。

当人造表面接触血液时，并发症发生了。当属于这种情况时，通过活化血小板和/或诱导凝结，增加诱导血栓事件的倾向。这些作用可能造成血管移植、心脏瓣膜、支架、导管或者任何其他血液接触装置或者材料的失效。此处公开的蛋白具有产生不致血栓的表面，因此还可以通过将该蛋白固定到如上所述的材料和装置上进一步利用。这种处理使得这类材料或装置生物相容和抗血栓。

当前用于尝试控制血小板粘附、活化和后续血栓形成和内膜增生的两条治疗路线是抗血小板剂和抗血栓给药。虽然药物例如阿司匹林通过抑制环加氧酶途径有效地阻断凝血烷A2的合成，但它们没有阻止胶原诱导的血小板粘附和活化，这刺激内膜增生的发展。肝素作为抗血栓剂的使用伴随着并发症和限制，包括不可预测的剂量反应、需要密切的实验室监控、对凝块结合的凝血酶的活性有限、多个抑制部位、抗凝血酶III依赖性、出血的风险，以及需要连续输液。显然，理想的治疗剂是一种产生位置特异和局部的效果，而且没有全身分布或者广泛凝血病的治疗剂。