[发明专利]氯化糖衍生物的酶促去乙酰化反应

说明书

技术领域

本发明涉及用于生产1-6-二氯-1-6-二脱氧-β-呋喃果糖-4-氯-4-脱氧-吡喃半乳糖苷(TBS)的新方法和新策略，包括在氯化反应后获得的6-O-保护的TGS的酶促去乙酰化反应。

背景技术

现有技术方法生产4，1’，6’三氯半乳蔗糖(TGS)的策略主要包括通过使用来自形成氯化的蔗糖-6-酯的Vilsmeier-Haack试剂来氯化蔗糖-6-酯以形成6-乙酰基-4，1’，6’-三氯半乳蔗糖，所述Vilsmeier-Haack试剂使用诸如三氯氧磷、草酰氯、五氯化磷等的不同氯化试剂和诸如二甲基甲酰胺(DMF)的三级酰胺(tertiary amide)。所述氯化反应后，使用适宜的钙、钠等的碱性氢氧化物中和反应物料至pH7.0～7.5。然后使用钙、钠、钾等的碱性氢氧化物进一步使已中和物料的pH升至9.5或更高以使6-乙酰基-4，1’，6’-三氯半乳蔗糖去酯化/去乙酰化形成4，1’，6’三氯半乳蔗糖。这一碱去酯化反应/去乙酰化反应包括将反应物暴露于碱性范围内的苛刻pH中，这导致了大量DMF被破坏，这是昂贵的投入，不利地影响其在反应后的回收。

在现有技术方法中，该反应混合物在去乙酰化反应时也暴露于苛刻温度中，这导致了产物TGS自身的破坏。

因此，需要一种不暴露DMF至破坏的去乙酰化的方法。

已经发展了一种方法，其在不暴露DMF至破坏的pH下完成酶促去乙酰化。

发明内容

Palmer等(1995)在美国专利no.5445951已经报道了酶促去乙酰化反应以制备蔗糖的部分乙酰化的衍生物，其利用蔗糖酯的酶促去乙酰化反应，从无水有机介质中的蔗糖酯，用能催化所述蔗糖酯去乙酰化的一种酶或酶的组合以产生在预选位置具有自由羟基的部分去乙酰化的蔗糖衍生物，并且回收所获得的部分去乙酰化的蔗糖衍生物，所述的蔗糖酯选自由蔗糖八酰酯(sucrose octaacylate)、蔗糖七酰酯和蔗糖六酰酯组成的组。

关于蔗糖酯或其衍生物/前体的酶促去乙酰化反应没有其它已知的报道。

本发明涉及在制备人工甜味剂TGS期间氯化反应后获得的6-O-保护的TGS的酶促去乙酰化。可以进行本发明所述过程的氯化反应混合物的实施方式包括但不限于，蔗糖-6-酯与一种氯化试剂混合后所获得的工艺液流，所述氯化试剂描述于Mufti等(1983)美国专利no 4380476、Walkup等(1990No.4980463)、Jenner等(1982)美国专利no.4,362,869、Tulley等(1989)美国专利no.4,801,700、Rathbone等(1989)美国专利no.4,826,962、Bornemann等(1992)美国专利no.5,141,860、Navia等(1996)美国专利no.5,498,709、Simpson(1989)美国专利no.4,889,928、Navia(1990)美国专利no.4,950,746、Neiditch等(1991)美国专利no.5,023,329、Walkup等(1992)5,089,608、Dordick等(1992)美国专利no.5,128,248、Khan等(1995)美国专利no.5,440,026、Palmer等(1995)美国专利no.5,445,951、Sankey等(1995)美国专利no.5,449,772、Sankey等(1995)美国专利no.5,470,969、Navia等(1996)美国专利no.5,498,709、Navia等(1996)美国专利no.5,530,106。

在6-O-保护的TGS中间产物分离后或未分离，中和氯化反应物料后，在以如上所提及的方式获得的工艺液流上进行酶促去乙酰化反应。由于该酶促反应，存在于已中和的反应物料中的溶剂三级酰胺不会分解并因此导致所述溶剂的回收率提高。在本发明中，用适宜的碱中和氯化反应后的氯化反应物料。中和时，pH被控制为低于6.0，形成的化合物TGS在6位仍旧具有完整的被保护基团。在带有或不带有分离所述化合物下进行该6位的去保护(deblocking)。另外的一些参考文献也指出可在有或没有三级酰胺和其它溶剂和水溶液条件下进行该去保护。

本发明描述了使用酶促方法在6位去乙酰化反应，其中，在三级酰胺(包括用于氯化反应的DMF)存在或不存在时，酶选择性地除去被保护的基团。本发明的方法对不是氯化反应结果的实施方式(例如纯TGS-6-酯的单一溶液)的去乙酰化效果也很好。