[发明专利]抗IL2抗体

说明书

本发明涉及特异结合人细胞因子IL2的抗体及其片段。本发明还涉及编码该抗体及其片段的多核苷酸、包含该抗体及其片段的药物组合物和涉及该抗体及其片段的医学用途。

人IL2是有133个氨基酸的蛋白质(15.4kDa)，其不与其他任何因子带有显著的序列同源性。IL2作为153个氨基酸的前体蛋白合成，前20个氨基末端氨基酸作为疏水分泌信号序列。该蛋白质包含对生物活性至关重要的单个二硫键(连接位置Cys58/105)。

IL2的生物活性由膜受体介导，所述膜受体几乎专门在活化的T细胞上表达，而不在静息T细胞上表达。完整的IL2受体由3个I型穿膜蛋白亚基构成：α、β和γ；较低亲和性的功能性受体可以仅由β和γ受体蛋白组成。静息的B细胞和静息的单核白细胞很少表达该受体。IL2受体(尤其是α亚基)的表达由许多因子调节，例如有IL5、IL6和L2R/p55诱导因子。

小鼠和人IL2都能使同种物种T细胞高效增殖。人IL2对小鼠细胞也有作用，但反之不然。IL2是所有T淋巴细胞亚群的生长因子。它对于T细胞来说，是抗原非特异性的增殖因子，其能诱导静息的细胞中的细胞周期进程并由此使T淋巴细胞克隆扩增。IL2也促进活化的B细胞的增殖和分化。与T细胞的增殖一样，该活性也需要存在其他因子，例如IL4。

由于其对T细胞和B细胞的效应，IL2成为免疫应答的核心调节剂。药物的临床功效很好地说明了IL2对适应性免疫应答的起始和扩增的核心重要性，所述药物最常用于抑制不希望产生的免疫应答，如移植排斥。免疫抑制药物环孢霉素A和FK506(他克莫司)通过阻断经由T细胞受体的信号递送来抑制IL2产生，而雷帕霉素(西罗莫司)抑制经由IL2受体的信号递送。环孢霉素A和雷帕霉素协同作用，通过防止IL2驱动的T细胞克隆扩增来限制免疫应答。可是，所有这些化合物都靶向细胞内信号递送途径，其不但专门干扰IL2，而且干扰其它因子。这意味着这些药物的临床应用会由于它们有限的靶位专一性而带来不希望产生的副作用的相当大风险。

IL2活性的抗体抑制剂的许多例子也是现有已知的，例如商品化的抗体daclizumab(Zenapax，Protein Design Lab，Inc.)。可是，IL2活性的已知抗体抑制剂通过结合IL2受体而不是抗原本身来发挥它们的生物学效能。考虑到IL2活性抑制剂的重要的临床应用，本发明的目的是提供IL2活性的另外的特异性抑制剂。

因此，本发明的一个方面提供了特异结合人白细胞介素-2(IL2)的人源化单克隆抗体或其片段，其中所述人源化单克隆抗体通过在所述人IL2与人IL2-受体结合之前、之中、和/或之后结合所述人IL2来中和人IL2的活性，而且其中所述人源化单克隆抗体的轻链可变区在其第二框架区中包含连续的氨基酸序列KAPKA，优选其在氨基酸位置第42-46位上。

本文所用的术语“人源化单克隆抗体”、或“人源化抗体”、或“人源化免疫球蛋白”、或其语法上相关的变型可互换使用，指包含源自一种或多种非人免疫球蛋白的抗原结合位点的分子，所述分子另外还包含至少一个部分，如源自一种或多种人免疫球蛋白或其生殖系序列的轻或重链可变结构域的至少一个框架区。本文所用的“人源化抗体”包括人源化轻链可变结构域免疫球蛋白和人源化重链可变结构域免疫球蛋白。人源化抗体可包括部分或完全源自一种或多种人基因序列(包括合成类似物)的恒定区。预计人源化抗体像提供CDR的供体抗体那样结合相同的靶抗原。通常除了CDR，人源化抗体或免疫球蛋白的所有节段或部分都与天然产生的或共有的人免疫球蛋白序列的相应节段或部分基本上一致或基本上同源。

所述人源化单克隆抗体的轻链可变区(VL)在其第二框架区中包含连续的氨基酸序列KAPKA，优选其位于氨基酸位置第42-46位。该优选序列的编号，即位置第42-46位，指如“VBase”数据库(MRC蛋白质工程中心)所示的编号，其可在互联网地址http://www.mrc-cpe.cam.ac.uk处获得。为了清楚起见，人生殖系VL的框架区序列(作为V-κ和V-λ序列)和VH区的框架区的序列比对包括在本申请中，这些序列也出现在Vbase中(分别参见图7、8和9，尤其是图8a和9a，中对人生殖系V-κ和V-λ序列中的第二轻链框架区的编号)。