[发明专利]具有可切割连接物的单链抗体

说明书

相关申请的交叉引用

[0001]本申请是2005年4月26日递交的60/675,218的非临时申请，将其以引用的方式在此全文引入用于所有各种目的。

背景技术

[0002]虽然哺乳动物细胞体系已成功地用于制造医疗用途的抗体，但是其开发昂贵，并且目前没有足够的生产能力以满足未来对抗体的预期需求。从低等真核生物和细菌中表达蛋白的细胞体系更加低廉并且更易于操作，但涉及其他一些制造抗体的困难。在这些细胞类型中，由于在这些体系中完整抗体的折叠和/或产率很差，之前大部分工作局限于抗体片段而不是完整的抗体的表达(参见，例如Better et al.，Science240，1041-1043(1988))。然而，抗体片段仅仅在抗体的结合对于治疗活性是充分的情况下，换言之，在不需要效应子功能时有用。

[0003]即使当不需要效应子功能时，由于不具有合适的糖基化，由原核生物和低等真核生物制造的抗体通常也不及来源于哺乳动物细胞的抗体有用。不同的生物体制造不同的糖基化酶(例如，糖基转移酶和糖苷酶)，具有不同的底物(核苷酸糖)，因此所述糖基化的模式以及各个寡糖的组成，甚至对于相同的蛋白，也会根据其中将表达特定蛋白的宿主体系而不同。细菌通常不对蛋白进行糖基化，即使进行糖基化，也仅仅是以相当非特异的方式进行(Moens and Vanderleyden，Arch Microbiol.168(3)：169-175(1997))。低等真核生物诸如丝状真菌和酵母主要添加甘露糖和甘露糖磷酸酯糖。所得聚糖已知为“高甘露糖”型聚糖或甘露聚糖。植物细胞和昆虫细胞(诸如Sf9细胞)通过其他方式对蛋白质进行糖基化。相比较，在高等真核生物如人类中，新生寡糖侧链可经过修饰而移去数个甘露糖残基并通过附加通常在低等真核生物的N-聚糖中没有发现过的糖残基而延长(Coloma et al.，2000，Mol.Immunol.37：1081-1090；Raju et al.，2000，Glycobiology，10：477-486；Weikert，et al.NatureBiotechnology，1999，17，1116-1121；Malissard，et al.Biochemical andBiophysical Research Communications，2000，267，169-173)。在细菌或低等真核生物制造的抗体中缺乏合适的糖基化可对治疗用蛋白的免疫原性、药物代谢动力学性质、运输和功效产生不利影响。

[0004]已知在细菌和低等真核生物中表达的抗体片段的一种形式为单链抗体(参见例如US 4,946,778和US 5,132,405)。这些分子包括通过间隔肽与重链可变区分开的轻链可变区，但典型地缺少部分，通常缺少全部的恒定区。所述单链抗体形式非常适用于为所需的结合特异性进行的大量抗体的筛选，尤其是通过噬菌体展示(参见例如McCafferty et al.，Nature 348,552,554(1990))。在这些筛选中，相对于完整的抗体，更小尺寸的单链抗体优势在于能实现展示而不破坏噬菌体的生存能力，并且所述恒定区的缺失与结合特异性无关。已提出缺少恒定区的小尺寸单链抗体在不需要效应子功能的应用中对于治疗目的具有优势(Cochet et al.，Cancer Detect.Prev.，23，506-510(1999)；McCall et al.，Mol.Immunol，36，433-445(1999)；Pavlinkova et al.，J.Nuclear Med.，40，1536-1546(1999))。已提出所述小尺寸能提高对目标组织的渗透。还已报道由于可解的抗体构象的数目减少，所述小尺寸在减少错误的折叠方面也有优势(Jaeger et al.，FEBS Letters，462，307-312(1999))。

发明内容