[发明专利]携带低水平猪内源性逆转录病毒的猪及其使用

说明书

技术领域

本发明涉及筛选和保持携带低拷贝猪内源性逆转录病毒的猪种群的方法，并且涉及这些猪作为这些异种移植适用的细胞、组织和/或器官的来源的用途。本发明进一步涉及从这些猪筛选适合在异种移植中使用的细胞、组织和/或器官的方法。

背景技术

器官移植对于晚期器官衰竭是一个有效的治疗，但是严重受限于供体器官的短缺。每年大量的人在等待器官的时候死去。除了得到供体器官的困难外，器官移植的费用也限制了器官移植手术实施的数量。

动物能够提供器官和组织的可选择的供体来源已经激起了许多争论。由于供体器官的短缺，异种移植明显具有减少痛苦和死亡的潜力，然而关于这个程序还是有些安全方面的担心。担心包括异种移植的受体和接触这些受体的人以及相继的广大公众受传染的风险。

最严重担心的是从异种移植传播给受体包括微生物的有传染性的因子的可能性，并且随之出现新的人的传染病和可能疾病的潜在可能性。猪被认为是除了非人类的灵长类外优选的供体动物的一个主要原因是可以减少它们所携带的微生物负荷的风险。应当指出，传播微生物的风险并非是异种移植独有。很多在同种移植(allotransplantation)中造成生物体传播从而引起疾病的例子已经被证明。

然而，当与物种内传播相比时对于物种间交叉感染(人畜共患病(zoonosis))要给予特殊的关注，这是因为有传染性的生物体在异源宿主中的行为不能通过它在天然宿主中的致病性来预测。在它们天然宿主中是良性的生物体可在人畜共患病的情况下导致明显的发病率。例证包括人感染后有潜在致命性的猪尼帕病毒(Nipah virus)、灵长类疱疹病毒和啮齿类动物汉坦病毒(hantavirus)(1)。

由于异种移植的受体通常是处于免疫抑制状态的，所以也增强了交叉感染的风险。

可以随着器官、组织或细胞群被转移的微生物改变潜能并在受体体内建立感染。病毒诸如猪嗜淋巴细胞疱疹病毒(PLHV)、猪巨细胞病毒(cytomegalovirus)(PCMV)和猪环行病毒(circovirus)(PCV)，所有的这些都是在猪种群中高度流行的(参看例如2)，其都能够建立持久的感染并且被认为具有潜在的致癌性。关于巨细胞病毒在猪到灵长类器官移植中激活的数据显示猪巨细胞病毒(PCMV)可能是免疫抑制的异种移植受体的一个重要的病原体(3)。已经有报道，猪环行病毒2型可在体外感染人的细胞(4)。

然而，最大的风险可能来自于那些生物体，其在器官中无症状潜伏时仍有传播的能力。这些生物体包括内源性逆转录病毒(ERV)和疱疹病毒。当有报道称三个内源性逆转录病毒家族中的两个可以在体外感染人的细胞时(5)，猪内源性逆转录病毒(PERVs)就已经成为焦虑的主要来源并可能成为对于异种移植最重要的安全担心。

并不象猪携带的其它有传染性的生物体一样，猪内源性逆转录病毒(PERV)不在动物间作为有传染性的因子传播而是被所有动物作为它们生殖细胞DNA的一部分而遗传。这样，病毒形成了部分基因组从而出现在每个细胞中。在猪之间病毒出现的数量不同，但据称每个细胞平均有大约50个拷贝的病毒并且传统饲养技术不能从猪群中除去这些病毒(6)。因此，传染性生物体的存在，尤其是猪细胞中的PERV病毒在异种移植的应用前景中是一个潜在的障碍。

因此现在需要产生适合异种移植的猪细胞、组织和/或器官并且要显著的减少可能传播给受体的生物体，因而显著降低人畜共患病感染的风险的方法。更特别的是需要产生携带低拷贝数猪内源性逆转录病毒(PERV)以用于异种移植的猪的细胞、组织和/或器官，从而把异种移植受体被传染的风险降到最低。本发明的目的是在某种程度上得到这些必需之物和/或给公众提供有用的选择。

发明内容

令人惊奇的是奥克兰岛猪种群在内源性微生物方面相比其它品种的猪具有独特的优势。特别是这种猪包含一个新的动物亚群，该亚群携带的猪内源性逆转录病毒(PERV)异乎寻常的低。因而可以预期选择性饲养这些动物所产生的后代将会携带更低水平的微生物，包括猪内源性逆转录病毒(PERV)的拷贝数。因此，这种猪特别适合于异种移植。

因此，在本发明的第一方面提供了饲养无传染性微生物的猪的方法，并且这些猪的猪内源性逆转录病毒(PERV)拷贝数在0～30之间。所述的方法包括以下步骤：

(a)筛选具有有益微生物谱的雄性和雌性的奥克兰岛猪，

(b)使步骤(a)中筛选的雄性和雌性猪进行交配，