[发明专利]用于分离和纯化核酸的方法有效
| 申请号: | 200680002305.X | 申请日: | 2006-02-02 |
| 公开(公告)号: | CN101103109A | 公开(公告)日: | 2008-01-09 |
| 发明(设计)人: | 佐佐木翼;猪股弘子;岩田里江 | 申请(专利权)人: | 富士胶片株式会社 |
| 主分类号: | C12N15/09 | 分类号: | C12N15/09;C12M1/26 |
| 代理公司: | 北京天昊联合知识产权代理有限公司 | 代理人: | 宋丹氢;张天舒 |
| 地址: | 日本*** | 国省代码: | 日本;JP |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 用于 分离 纯化 核酸 方法 | ||
1.一种用于分离和纯化核酸的方法,包括以下步骤:
(1)向生物材料中加入裂解溶液,以制备包含核酸的样品溶液,以及
向所述样品溶液加入水溶性有机溶剂或包含水溶性有机溶剂的溶液,从而制备包含水溶性有机溶剂的样品溶液;
(2)使所述包含水溶性有机溶剂的样品溶液与固相接触,从而将核酸吸附在所述固相上;
(3)使洗涤液与所述固相接触,从而在核酸被吸附在所述固相上的状态下,洗涤所述固相;以及
(4)使所述固相与回收液接触,从而使核酸从所述固相解吸,
其中在步骤(1)中,水溶性有机溶剂或包含水溶性有机溶剂的溶液至少分为两次加入。
2.根据权利要求1所述的用于分离和纯化核酸的方法,
其中所述步骤(1)包括:
在向所述样品溶液加入所述水溶性有机溶剂或所述包含水溶性有机溶剂的溶液至少一次之后,通过包括摇动、翻转、和旋转移动中至少一种的操作,搅拌所述样品溶液;以及
在搅拌之后,向溶液中进一步加入所述水溶性有机溶剂或所述包含水溶性有机溶剂的溶液至少一次。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的用于分离和纯化核酸的方法,
其中所述步骤(1)包括:
在向所述样品溶液加入所述水溶性有机溶剂或所述包含水溶性有机溶剂的溶液至少一次之后,通过至少包括抽吸和排出溶液的操作,搅拌所述样品溶液,以及
在搅拌之后,向溶液中进一步加入所述水溶性有机溶剂或所述包含水溶性有机溶剂的溶液至少一次。
4.根据权利要求1到权利要求3中任一项权利要求所述的用于分离和纯化核酸的方法,
其中,在所述步骤(1)中,所述包含水溶性有机溶剂的样品溶液中,水溶性有机溶剂的浓度在5质量%到90质量%的范围内。
5.根据权利要求1到权利要求3中任一项权利要求所述的用于分离和纯化核酸的方法,
其中,在所述步骤(1)中,所述包含水溶性有机溶剂的样品溶液中,水溶性有机溶剂的浓度在10质量%到60质量%的范围内。
6.根据权利要求1到权利要求3中任一项权利要求所述的用于分离和纯化核酸的方法,
其中,在所述步骤(1)中,包含水溶性有机溶剂的样品溶液中,水溶性有机溶剂的浓度在20质量%到40质量%的范围内。
7.根据权利要求1到权利要求6中任一项权利要求所述的用于分离和纯化核酸的方法,
其中,所述固相是包含有机聚合物的多孔膜,所述有机聚合物通过基本没有离子键参与的相互作用吸附核酸。
8.根据权利要求7所述的用于分离和纯化核酸的方法,
其中所述有机聚合物具有羟基。
9.根据权利要求7或权利要求8所述的用于分离和纯化核酸的方法,
其中,所述多孔膜包括由乙酰值不同的醋酸纤维素混合物经皂化得到的有机材料。
10.根据权利要求7到权利要求9中任一项权利要求所述的用于分离和纯化核酸的方法,
其中,所述多孔膜具有彼此不对称的正面和背面。
11.根据权利要求1到权利要求10中任一项权利要求所述的用于分离和纯化核酸的方法,
其中所述裂解溶液是核酸-溶解剂。
12.根据权利要求1到权利要求11中任一项权利要求所述的用于分离和纯化核酸的方法,
其中所述生物材料是动物组织。
13.根据权利要求11中所述的用于分离和纯化核酸的方法,
其中所述核酸-溶解剂包含选自以下试剂的至少一种:离液盐、核酸-稳定剂、表面活性剂、缓冲剂和消泡剂。
14.根据权利要求13中所述的用于分离和纯化核酸的方法,
其中所述离液盐包括选自盐酸胍和硫氰酸胍的至少一种。
15.根据权利要求1到权利要求14中任一项权利要求所述的用于分离和纯化核酸的方法,
其中所述水溶性有机溶剂为选自甲醇、乙醇、丙醇或其异构体以及丁醇或其异构体的至少一种。
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