[发明专利]采用动物细胞流加培养方式高效表达重组蛋白的方法有效
| 申请号： | 200610147535.7 | 申请日： | 2006-12-20 |
| 公开（公告）号： | CN101205530A | 公开（公告）日： | 2008-06-25 |
| 发明（设计）人： | 郭亚军;寇庚;王皓;侯盛;胡辉 | 申请（专利权）人： | 上海国健生物技术研究院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12P21/02;C12P21/08 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201203上海市浦东*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 采用 动物 细胞 培养 方式 高效 表达 重组 蛋白 方法 | ||
1.一种采用动物细胞流加培养方式高效表达重组蛋白的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：
(1)细胞培养温度36℃-38℃，PH值6.5-6.9，培养24-48小时，当动物细胞生长至适当密度时补加流加培养基，进行流加培养；
(2)细胞培养温度降至32.5℃-35℃，PH值7.0-7.3，进行流加培养；
(3)停止流加，细胞培养温度升至36℃-38℃，PH值7.0-7.3，进行培养。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中，所述的细胞适当密度为2.0-3.5×106cells/ml。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中，流加稀释率为0.1-0.3/天，流加培养时间72-96小时。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中，流加稀释率为0.1-0.2/天，流加培养时间120-144小时。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(3)中，所述的培养时间为24-48小时。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的流加培养基为无血清培养基。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的重组蛋白为单克隆抗体、融合蛋白以及各种基因重组蛋白质。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述的重组蛋白为重组人II型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述的重组蛋白为人源化抗HER-2单克隆抗体。
10.根据权利要求1至9任一所述的方法，其特征在于所述的动物细胞是CHO细胞。
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