[发明专利]一种人类核苷酸修复蛋白基因主要多态性位点快速检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种人类核苷酸修复蛋白基因(XRCC1)主要多态性位点R194W、R280H、R399Q快速检测方法，其特征采用PCR扩增人类染色体XRCC1基因外显子分别包含R194W、R280H、R399Q突变位点的基因序列，应用分子荧光探针与扩增产物杂交，应用荧光PCR仪实时测量PCR过程中反应液的特征性荧光信号强度变化，或PCR后应用荧光分光光度仪测量反应液的特异荧光强度，进行结果判断。

2.根据权利要求1的一种人类核苷酸修复蛋白基因(XRCC1)主要多态性位点R194W、R280H、R399Q快速检测方法，其特征在于选择引物为：可扩增XRCC1基因外显子分别包含R194W、R280H、R399Q突变位点的基因序列的引物对：

R194W突变：上游引物F：5’CCGTGTGAAGGAGGAGGATGAG 3’

           下游引物R：5’TACTCACTCAGGACCCACGTTG 3’

R280H突变：上游引物F：5’CCCAGTGGTGCTAACCTAATC 3’

           下游引物R：5’CGGGGTTTGCCTGTCACTG 3’

R399Q突变：上游引物F：5’TGGGTGCTGGACTGTCAC 3’

           下游引物R：5’GACTCCCCTCCAGATTCCTG 3’

3.根据权利要求1的一种人类核苷酸修复蛋白基因(XRCC1)主要多态性位点R194W、R280H、R399Q快速检测方法，其特征在于其检测R194W、R280H、R399Q突变的分子荧光探针：在两引物对扩增片段内分别设计与靶序列互补的两对寡核苷酸探针，5’端分别用FAM或HEX修饰，3’端用氨基修饰并标记DABCYL。其序列为：

R194W突变野生型探针序列：

Probe-wt：FAM-5’-GCGCTCAGCCGGATCAACAAGACAGCGC-3’-DABCYL

R194W突变突变型探针序列：

Probe-mu：HEX-5’-GCACGGCTCTCTTCTTCAGCTGGATCGTGC-3’-DABCYL

R280H突变野生型探针序列：

Probe-wt：FAM-5’-CGCTGCCAGCTCCAACTCGTACCAGCG-3’-DABCYL

R280H突变突变型探针序列：

Probe-mu：HEX-5’-CGCTGCCAGCTCCAACTCATACCAGCG-3’-DABCYL

R399Q突变野生型探针序列：

Probe-wt：FAM-5’-CGCGACTCCCGGAGGTAAGGCCTCGCG-3’-DABCYL

R280H突变突变型探针序列：

Probe-mu：HEX-5’-GCGCTGCCCTCCCAGAGGTAAGGAGCGC-3’-DABCYL。

4.根据权利要求1的一种人类核苷酸修复蛋白基因(XRCC1)主要多态性位点R194W、R280H、R399Q快速检测方法，其特征在于均相荧光探针PCR检测R194W、R280H、R399Q突变的试剂盒包括：反应混合液；突变型对照；野生型对照；样品提取液；使用说明书。

5.根据权利要求1的一种人类核苷酸修复蛋白基因(XRCC1)主要多态性位点R194W、R280H、R399Q快速检测方法，其特征在于分别检测R194W、R280H、R399Q突变的试剂盒反应混合液为：1×PCR缓冲液(0.1％TritonX-100；2.0～6.0mmol/L MgCl₂；8mmol/L(NH₄)₂SO₄；50mmol/L KCl；10mmol/L Tris-HCl(pH8.0))；内含两引物各0.3μmol/L，Probe-wt0.2μmol/L，Probe-mu0.3μmol/L；dNTP各250μmol/L，HotTaq酶1.5U，反应总体积50μl。

6.根据权利要求1的一种人类核苷酸修复蛋白基因(XRCC1)主要多态性位点R194W、R280H、R399Q快速检测方法，其特征在于：所设计探针序列可应用于杂交芯片检测人类染色体XRCC1基因外显子的R194W、R280H、R399Q突变。

7.根据权利要求1的一种人类核苷酸修复蛋白基因(XRCC1)主要多态性位点R194W、R280H、R399Q快速检测方法，其特征在于检测R194W突变的试剂盒突变型对照为R194W突变型DNA序列，野生型对照为R194W野生型DNA序列；检测R280H突变的试剂盒突变型对照为R280H突变型DNA序列，野生型对照为R280H野生型DNA序列；检测R399Q突变的试剂盒突变型对照为R399Q突变型DNA序列，野生型对照为R399Q野生型DNA序列。