[发明专利]SIP45基因及其编码的蛋白和应用

说明书

技术领域

本发明涉及SIP45基因，该基因编码的SIP45蛋白，以及所述基因和蛋白在医学中的应用。

背景技术

某些蛋白可以调控肿瘤细胞的生长和增殖，这种调控是通过细胞内复杂的蛋白分子间相互作用而实现的。通过探索与已知调控肿瘤生长的因子相互作用的新的蛋白，可以发现调节肿瘤生长的新途径，为肿瘤的治疗提供新的方法和手段。

发明内容

本发明发现了一种参与调控细胞生长增殖的新的蛋白，克隆了编码该蛋白的基因，构建了含有该基因的表达载体和含有该表达载体的宿主细胞，对该蛋白进行了真核细胞的表达和体外纯化，完成了其组织细胞表达谱的分析，并得到了特异性的多克隆抗体。

因此，在一个方面，本发明提供了可调控肿瘤细胞的生长和增殖的蛋白，尤其重组蛋白，该蛋白具有序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列，或者通过所述氨基酸序列中的一个或多个氨基酸的缺失，取代或增加而得到的氨基酸序列。

在另一个方面，本发明提供了编码上述蛋白的基因，它是具有与SEQ ID No.1所示的DNA或者与所述DNA在严格条件下杂交的DNA。

在另一个方面，本发明提供了含有上述基因或者编码上述蛋白的基因的表达载体。

在又一个方面，本发明提供了由上述表达载体转化的宿主细胞。

在另一个方面，本发明提供了生产本发明的重组蛋白的方法，该方法包括下列步骤：

培养上述转化的宿主细胞，使转化细胞产生本发明的重组蛋白；和

从培养物中分离出重组蛋白。

在另一个方面，本发明提供了针对上述蛋白的抗体，它是使用所述重组蛋白作为免疫原而产生的特异性抗体。它可以是单克隆或多克隆抗体。

在另一个方面，本发明提供了检测所述蛋白的试剂盒，它含有上述特异性抗体，可以进行抗原-抗体反应，用于检测具有序列表SEQ IDNo.2所示的蛋白。

此外，本发明提供了用于检测如序列表核苷酸序列SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的探针诊断试剂盒，它含有与序列表核苷酸序列SEQ ID No.1中的部分核苷酸序列互补的核苷酸序列。它可以是一个具有15-300个碱基的DNA片段。通过探针杂交的方法，用于检测含有所述核苷酸序列的mRNA的表达，该mRNA被翻译为含有序列SEQ IDNo.2所示的氨基酸序列的蛋白。

此外，本发明提供了一个引物对，用于对进行PCR扩增，引物如下所示：

引物1：5’-GGA ATT CAT GTC CCT TGC TCG GGG CCA TGG AG-3’

引物2：5’-CGG GAT CCT CAG TAT TTC CGC TGC CGA GGG AAG-3’。

本发明还提供了上述基因、蛋白或抗体在制备治疗肿瘤的药物中的应用。

本发明还提供了一种治疗肿瘤，尤其子宫癌的药物组合物，该药物组合物可以包含治疗有效量的蛋白以及药学可接受的载体或赋型剂，这样的载体包括但不限于：盐水，缓冲盐水，葡萄糖，水，甘醇，乙醇，或混合物，这些制剂应适合给药方式。

本发明的药物组合物可以以适当的方式给药，如通过局部、静脉内、腹腔内、肌内、皮下等途径给药。给药于患者的用量取决于许多因素，如给药方式，待治疗者的身体条件和诊断医生的判断。

SIP45(SRC-1 interacting protein，Molecular Weight 45kDa)是由p160家族成员之一的SRC-1通过酵母双杂交的方法筛选出来的新基因。为了得到全长的SIP45基因ORF，我们提取了人子宫内膜癌Ishkawa细胞的总mRNA，以其为模本，并前文所提供的相应于SIP45基因ORF起始及终止区的特异引物，进行RT-PCR反应。由于在上下游引物中分别含有EcoRI和BamHI的酶切位点，使得PCR产物可导入pCDNA3.1质粒载体中，经扩增，测序，从而确定得到正确的克隆。SIP45的ORF序列还被插入带有5’端Flag标签的pCDNA3.1质粒、原核表达载体pGEX4T3、及真核表达荧光融合蛋白所需的pEGFPC2质粒中。所有SIP45-质粒DNA均经测序确定其读码框架及编码序列的正确无误。