[发明专利]重组人角质细胞生长因子－2的高密度发酵方法

权利要求书

1.一种重组人角质细胞生长因子-2(rhKGF-2)的生产方法，其特征在于，该方法包括步骤：

a)在适合的表达条件下，在摇瓶中培养宿主细胞，从而以包涵体形式表达出人rhKGF-2；

b)在适合的表达条件下，在5L发酵罐中优化出最佳中试生产方案。

2.如权利要求1所述的宿主细胞，其特征在于，它是大肠杆菌。

3.如权利要求1所述的宿主细胞，其特征在于，它含有一种原核表达载体。

4.如权利要求3所述的表达载体，其特征在于，它是含有编码人rhKGF-2的核苷酸序列。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(a)所示的表达条件为：较佳培养基为改良M9-4培养基，IPTG浓度为1mM，摇瓶水平诱导起始菌密度选择在OD₆₀₀ 3～4之间，诱导温度为37℃，诱导时间为3～5hr，诱导pH为6.8～7.2，诱导时间在3～4小时的范围为最佳，并且补料以选择Tryptone和葡萄糖作为KGF-2表达的首选补料搭配。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(b)所示的表达条件为：最佳培养基改良M9-4，上罐较佳OD₆₀₀为0.5～1，诱导OD₆₀₀控制在1.2～2之间较佳，温度37℃，DO≥50％，OD₆₀₀ 1.2～2时用1mM的IPTG开始诱导，诱导阶段pH：7.0，诱导最佳时间应为3～4hr，诱导结束OD₆₀₀：15～20。