[发明专利]一种利用菌种改良水体的微生物制剂及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用菌种改良水体的微生物制剂及制备方法，可通过在水体中直接添加，利用硝化菌迅速降解水体中氨氮及亚硝酸含量，同时将池塘中的诱饵和动物排泄物等有机污染物质分解为小分子物质，从而被水体中有益藻类及其它浮游生物利用、吸收，形成适于水产动物生长的良性生态环境，属于农业生物制品技术领域。

背景技术

随着我国水产养殖集约化的蓬勃发展，养殖水环境污染日益严重，与此同时，未经处理的养殖废水和工业、生活污水的排放使水体受到严重污染，养殖生态环境遭到破坏，导致病原微生物种类增多和传播速度加快，养殖生物病害发生日趋严重，给水产养殖业造成严重损失。据不完全统计，每年全国发生中等程度以上的养殖病害面积占养殖总面积的15％～20％，产量损失超过100万吨。由于环境恶化造成的水产动物疾病或由此引发的传染性疾病大量剧增，已成为制约水产养殖业健康发展的主要障碍。长期使用抗生素和其他化学药物防治养殖病害已引发了一系列环境和社会问题，其突出表现为产品中抗生素和有害化学物质残留增加，水产品价格长期低迷。

目前，已申请的专利，申请号为CN02156977.0，题为一种低温硝化菌剂及其用途，其特征在于：一种耐低温硝化菌剂，该低温硝化菌剂涉及汉堡硝化杆菌、维氏硝化杆菌、蜡状芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、和酿酒酵母共六种菌株，这些菌株经培养后，按其培养物同等体积比例配比组成为耐低温硝化菌剂，在较低温度下具有去除超低浓度氨氮的作用，单独使用或与相应的生物反应器适配，可用于海水养殖和工厂化循环海水高密度养殖的氨氮去除和COD的去除处理。此技术中硝化菌仅适用于低温养殖环境如海水养殖中，应用范围狭窄，同时，需要与相应的生物反应器配合，复合菌种多、步骤繁琐，不利于在生产上推广及应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高产品活菌数量的利用菌种改良水体的微生物制剂及制备方法。

为实现以上目的，本发明的技术方案是提供一种利用菌种改良水体的微生物制剂，其特征在于，所述的菌种在复合前的重量百分比为：亚硝化菌20-40％、硝化菌20-40％、地衣芽孢杆菌20-60％。

一种利用菌种改良水体的微生物制剂的制备方法，其特征在于，选取有效降解氨氮及亚硝酸含量的硝化细菌，采用定向技术进行富集和分离，同时采用定向富集与发酵工艺相结合，将硝化菌的富集、扩大一步完成，同时添加具有分解有机废物的芽孢杆菌，在后处理阶段添加适于硝化菌作用及增殖的载体，其步骤为：第一步：生产菌株的选育

a.菌株来源采集：收集餐厨废水中底层污泥，滴加两滴格利斯试剂，观察溶液是否呈红色或粉红色，根据颜色深浅判断亚硝酸含量，滴加二苯氨试剂2滴，观察颜色是否呈蓝色，根据颜色深浅判断硝酸含量；

b.富集培养：选取颜色较深的上述废水作为筛选源，分别按2％比例添加到灭菌后的硝化菌和亚硝化菌的富集培养基中，置30-38℃环境中200-240r/min摇床培养7-10天，每隔几天用格利斯试剂在白瓷板上检验亚硝酸根的生成，培养7-10天后培养液呈红色，表示亚硝化菌已存在，用二苯胺试剂检查是否有硝酸根存在，呈蓝色，表示硝化菌已存在，用颜色深浅判断作用强弱，选出作用强的试管，汲取试管中的培养液再进行以上步骤继续培养，重复2-3次，可不断淘汰其它异养菌，增加亚硝酸钠或硫酸氨以增加硝化菌和亚硝化菌的数量，分别得到硝化菌富集液和亚硝化菌富集液；

c.菌种分离：将硝化菌富集液和亚硝化菌富集液通入二氧化碳0.5-1小时，在水洗洋菜做凝固剂所配制的平板和硅胶平板上用富集培养液分别接种，30-38℃温度下培养7天后，观察到的针尖大小的菌落即为纯化了的菌种，在分离培养基的试管中保存；

d.地衣芽孢杆菌菌种：采用土壤利用营养琼脂培养基分离出地衣芽孢杆菌菌种，在盛有营养琼脂培养基的茄子瓶中培养保存；

e.生产制种：将硝化菌富集液菌种转接入装有硝化菌分离培养基的茄子瓶中，将亚硝化菌富集液菌种转接入装有亚硝化菌分离培养基的茄子瓶中，将地衣芽孢杆菌菌种转接入营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35-40℃温度下培养45-50小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时即可取出，然后放入2-6℃的冰箱中进行保存；

第二步：菌剂定向富集培养

a.亚硝化菌的富集培养：将亚硝化菌按2％比例接种于120℃、30min高温灭菌的亚硝化菌富集培养基中，搅拌转速为150-200r/min，培养温度为30-38℃，通气量1∶1，培养5-7天，培养过程中取样检查亚硝酸的生成情况，根据颜色判断富集效果；