[发明专利]一种利用菌种改良水体的微生物制剂及制备方法

权利要求书

1.一种利用菌种改良水体的微生物制剂，其特征在于，所述的菌种在复合前的重量百分比为：亚硝化菌20-40％、硝化菌20-40％、地衣芽孢杆菌20-60％。

2.根据权利要求1所述的一种利用菌种改良水体的微生物制剂的制备方法，其特征在于，选取有效降解氨氮及亚硝酸含量的硝化细菌，采用定向技术进行富集和分离，同时采用定向富集与发酵工艺相结合，将硝化菌的富集、扩大一步完成，同时添加具有分解有机废物的芽孢杆菌，在后处理阶段添加适于硝化菌作用及增殖的载体，其步骤为：

第一步：生产菌株的选育

a.菌株来源采集：收集餐厨废水中底层污泥，滴加两滴格利斯试剂，观察溶液是否呈红色或粉红色，根据颜色深浅判断亚硝酸含量，滴加二苯氨试剂2滴，观察颜色是否呈蓝色，根据颜色深浅判断硝酸含量；

b.富集培养：选取颜色较深的上述废水作为筛选源，分别按2％比例添加到灭菌后的硝化菌和亚硝化菌的富集培养基中，置30-38℃环境中200-240r/min摇床培养7-10天，每隔2-3天用格利斯试剂在白瓷板上检验亚硝酸根的生成，培养7-10天后培养液呈红色，表示亚硝化菌已存在，用二苯胺试剂检查是否有硝酸根存在，呈蓝色，表示硝化菌已存在，用颜色深浅判断作用强弱，选出作用强的试管，汲取试管中的培养液再进行以上步骤继续培养，重复2-3次，可不断淘汰其它异养菌，增加亚硝酸钠或硫酸氨以增加硝化菌和亚硝化菌的数量，分别得到硝化菌富集液和亚硝化菌富集液；

c.菌种分离：将硝化菌富集液和亚硝化菌富集液通入二氧化碳0.5-1小时，在水洗洋菜做凝固剂所配制的平板和硅胶平板上用富集培养液分别接种，30-38℃温度下培养7天后，观察到的针尖大小的菌落即为纯化了的菌种，在分离培养基的试管中保存；

d.地衣芽孢杆菌菌种：利用营养琼脂培养基分离出地衣芽孢杆菌菌种，在盛有营养琼脂培养基的茄子瓶中培养保存；

e.生产制种：将硝化菌富集液菌种转接入装有硝化菌分离培养基的茄子瓶中，将亚硝化菌富集液菌种转接入装有亚硝化菌分离培养基的茄子瓶中，将地衣芽孢杆菌菌种转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35-40℃温度下培养45-50小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时即可取出，然后放入2-6℃的冰箱中进行保存；

第二步：菌剂定向富集培养

a.亚硝化菌的富集培养：将亚硝化菌按2％比例接种于120℃、30min高温灭菌的亚硝化菌富集培养基中，搅拌转速为150-200r/min，培养温度为30-38℃，通气量1∶1，培养5-7天，培养过程中取样检查亚硝酸的生成情况，根据颜色判断富集效果；

b.硝化菌的富集培养：将硝化菌按2％比例接种于120℃、30min高温灭菌的硝化菌富集培养基中，搅拌转速为150-200r/min，培养温度为30-38℃，通气量1∶1，培养5-7天，培养过程中取样检查硝酸的生成情况，根据颜色判断富集效果；

c.以上富集培养中每隔3天按2％比例添加硫酸氨及亚硝酸钠，以提高亚硝化菌和硝化菌的富集效果，培养过程中用稀释培养测数法(MPN)检测亚硝化菌和硝化菌的数量，在达到10⁷个/ml后结束培养；

第三步：菌种单独扩大培养

a.地衣芽孢杆菌的扩大培养：将茄子瓶菌苔接种子120-130℃、30-45min高温灭菌的培养基中，搅拌转速为200r/min-240r/min，培养温度为35-40℃，通气量1∶1，发酵时间为22-26小时，显微镜下观察90-95％生孢时结束；

b.培养效果检测：将发酵液取样在80℃、10min水浴加热，以杀死其它杂菌，在营养琼脂平板上培养24小时，检查芽孢数量达20亿/ml后停止发酵；

c.芽孢杆菌的高速离心：发酵液在5000-7000r/min的转速下高速离心，得到高浓度的地衣芽孢孢子浓缩液；

第四步：添加特殊载体

a.菌剂混合：将亚硝化菌、硝化菌、地衣芽孢杆菌浓缩液按20-40％、20-40％、20-60％的重量配比混合，搅拌30-45min后静置；

b.添加载体：将菌剂和载体以1∶3-5比例混合，混合后的流体在摇摆机上制粒，再进行沸腾干燥，干燥后的水分控制在3-5％；

c.粉碎过筛：物料干燥后，转入粉碎间进行粉碎，物料温度控制在45℃以下，粉碎后的物料过50目筛网，筛后粗料重新粉碎；取样检测，主要参数：水份≤5％、活菌数20亿/g；物理性状：灰白色固体颗粒。