[发明专利]一种复合型早老性痴呆动物模型的构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及医疗评价、检测技术，具体涉及用于筛选药物、研究疾病发生机制和评价药物疗效的动物模型的构建方法。

背景技术

早老性痴呆(Alzheimer Disease，AD)是一种常见的神经退行性疾病，其主要症状表现为记忆力减退，认知能力低下和思维迟钝，且进行性加重，最后生活不能自理而死亡，病程一般8～10年。随着社会老龄化进程的加快，AD的患病人数急剧上升，已成为威胁老龄特别是高龄人口身心健康的严重疾病，并带来了严重的社会、经济和家庭问题。

AD病人主要脑病理改变是形成大量神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles，NFTs)和大量老年斑、其分子标志物分别是异常磷酸化的tau蛋白和β-淀粉样蛋白(A-beta)。国外学者已采用转基因技术，在小鼠成功地复制出β-淀粉样蛋白沉积形成的老年斑样病变，从而使得未来AD治疗将减少A-beta沉积作为药物干预的靶标成为可能。NFTs的数量与AD临床痴呆程度正相关。因此，干预NFTs对AD的防治尤为重要。自从发现NFTs的主要成分是异常、过度磷酸化的tau蛋白聚集形成的双螺旋丝以来，国内外学者普遍公认，骨架蛋白tau的异常、过度磷酸化是NFTs形成的关键步骤。过度磷酸化tau蛋白的聚集不仅以缠结的形式存在，它也是神经毡纤丝和老年斑中的营养不良突起的主要成分。因此，在体诱导tau蛋白的异常过度磷酸化、老年斑形成和记忆障碍，在AD研究中有重要意义。

目前国外相关的大鼠模型有：(1)转染tau蛋白激酶基因的大鼠模型，该模型能高表达过度磷酸化的tau蛋白(野生型或人类tau蛋白的突变异构体)，可重复间歇饥饿刺激和对胰岛素信号转导途径作用的药物如atreptozotocin、tolbutamide、LY294002、wortmannin、PD98059等实验，但无行为学记忆障碍(JP2000253774)；(2)脑组织注射岗田酸(Okadaic acid，OA)慢性损害模型，OA是一种磷酸酯酶抑制剂，通过微渗透泵输送到侧脑室，持续6周后，大鼠脑的纹状体、海马和皮质等部位出现高磷酸化tau蛋白免疫阳性神经元，并伴有工作记忆和参考记忆的损害(Arent T，1995)；(3)通过大鼠侧脑室或海马注射蛋白激酶激动剂(wortmannin，WT)或抑制剂(GFX)诱导蛋白tau过度磷酸化的动物模型，尤其是联合用药(专利公开号：CN1636601A)，该模型只是单次脑内注射，维持时间短。此外，方法(2)和(3)均需要脑内注射，操作难度大；三种方法均不能复制同时体现tau，A-beta和行为学异常的动物模型。

发明内容

本发明的目的在于提供一种复合型早老性痴呆动物模型的构建方法，以构建出AD样老年斑、tau蛋白过度磷酸化与学习、记忆障碍同时出现的早老性痴呆动物模型。本发明提供的这种复合型早老性痴呆动物模型的构建方法，是给哺乳动物，如大鼠，注射同型半胱氨酸(homocystin，Hcy)，干扰甲基化反应，注射方法可以实施尾静脉注射、腹腔注射或侧脑室注射。

实现本发明的技术方案是：给哺乳动物注射同型半胱氨酸(homocystin，Hcy)，如给大鼠注射同型半胱氨酸构建复合型早老性痴呆动物模型，所述的注射可为尾静脉注射、腹腔注射或侧脑室注射。大鼠尾静脉注射方法是：将大鼠在清醒状态下固定，从尾静脉缓慢注入(注射速度为：1ml/约10秒)Hcy；腹腔注射方法是：将大鼠在清醒状态下固定，从腹腔缓慢注入(注射速度为：1ml/约5秒)Hcy；大鼠侧脑室注射方法是：将大鼠麻醉后固定在脑立体定位仪上，清晰暴露前后囟，于前囟后1.0～1.2mm，中线旁侧1.5～1.8mm垂直进针至硬膜下约3.5～3.8mm，用牙科水泥固定留针，缓慢注入(注射速度为：20μl/约1min)Hcy。

同型半胱氨酸homocystin的注射剂量为：尾静脉注射：每次注射浓度为100μM的同型半胱氨酸1ml，每天1次，持续14天，或每周1次，持续半年；腹腔注射：每次注射浓度为100μM的同型半胱氨酸1ml，每天1次，持续14天，或每周1次，持续半年；侧脑室注射：每次注射浓度为100μM的同型半胱氨酸20μl，每天1次，持续14天。