[发明专利]乳癌蛋白

说明书

本发明涉及一种进行蛋白分组(proteomics)的方法，尤其是对人显微切割样品，以及不同的蛋白在作为乳癌诊断和/或治疗标记中的应用，和试剂在调节辅助蛋白中的应用。

乳癌是在女性中所发现的最为普遍的癌症的一种。预计最新病例的数目接近215,990(32％)，同时2005年度在美国预计将有超过40,000的死亡病例。因此需要更好地去了解上述癌症潜在的分子学机制，以便改进诊断和治疗方法。为了达到上述目的，经常采用模型体系，如细胞培养模型。然而，在判断从上述体系中得到怎样的结果才能真实反映人类疾病(尤其癌症)所对应的生物学机制方面，存在诸多疑问。因此，非常有必要检测来自初始临床组织的细胞。对于上述手段，通常使用基因阵列研究方法，因为已有合适的标准研究方案。但是，性状蛋白，如已经周转或经过翻译后修饰的蛋白，则不能被基因阵列检测到。

蛋白分组是对存在于复杂生物系统中的蛋白的研究。然而与该科学领域相关的并在现有技术中已知的，适用于分析大部分人类初始组织样品的方法非常少，因为通常情况下所采集到的样品材料的量非常有限。此外，相应的疾病细胞通常与组织中许多其它类型细胞相混，因此需要进一步的技术，尤其是显微切割技术来解决上述问题，但这又进一步加剧了样品量少的问题。毫无疑问，有限的蛋白量关系到对蛋白丰度的估测。因此需要作多个重复试验才能获得统计学意义上的结果，这又再次回到了样品量稀少的问题上。此外现有的筛选方法还在检测早期和较小阶段肿瘤方面存在难题。

因此，本发明的目的是提供用于诊断和/或治疗癌症的方法、标记、治疗靶标和合适的试剂。上述方法将是有益的，能够使从利用显微切割技术得到的人样品中所获得的蛋白风度的估测更加可靠。

为了达到上述目的，本发明首先提出了一种具有权利要求1所限定特征的方法。本发明方法的进一步实施方式描述在从属权利要求2-10中。另外，本发明包含所述方法在进行蛋白分组中的应用，和几种蛋白作为诊断标记和/或治疗靶标中的应用，上述应用是权利要求11-20所要求保护的。此外，本发明还涉及至少一种调节权利要求21和24所要求保护的至少一种蛋白的表达和/或活性的试剂。所有权利要求的相关描述全文引入本说明书。

达到根据本发明的第一个目的是通过如下方法实现的，即对人样品进行蛋白分组的方法，尤其是人类显微切割样品，其中将所述样品基于预期参数分成两个或更多个组，所述组具有至少一种如下蛋白，是各组所共有的，但是在各组之间存在差异显示的蛋白。

在此所用的术语“显示”等同于“丰度”，上述两个术语是指用现有方法能够检测的蛋白的表达水平，尤其是使用二维，本申请人称之为ProteoTope的分析方法。

在此所用的术语“肿瘤”是指增殖细胞或组织，包括所有形式，良性或恶性或有此趋向。

根据本发明，术语“蛋白”包括完整的或部分序列的蛋白，其中所述部分序列具有蛋白的活性。此外，术语“蛋白”包含其同工型。

虽然通常人们认为分组方案在其它领域存在优势和劣势，尤其是在分析信使RNA时(Kendziorski CM，Zhang Y，Lan H，Attie AD，2003，The efficiency of pooling mRNA in microarray experiments.Biostatistics.4：465-77)，但是本发明人首次提出并试验了对性状蛋白进行分组的方案，特别是为了诊断和/或治疗癌症的目的，尤其是乳癌。

在本发明的一个实施方式中，基于对至少一种蛋白表现出的阳性或阴性，将人样品进行分组，特别是对至少一种受体，优选对至少一种激素结合受体，或其mRNA。优选的，上述受体是雌激素受体(ER)和/或孕酮受体(PR)。

雌激素受体(ER)包含两种特异于核受体的类型，已知是雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)。分子学分析已经证实ERα，类似于其它核受体，由独立的区域组成，分别负责DNA结合(DNA结合区，DBD)，激素结合(激素结合区，HBD)和转录活化区。纯化受体的N-末端活化功能(AF-1)是构成性活化，位于C-末端部分的活化功能(AF-2)需要激素的激活。