[发明专利]新的玉米种子切块外植体和玉米离体再生的方法

权利要求书

1.一种适于转化的玉米外植体，该外植体包括纵向切成两半的玉米种子，其中切开后的种子暴露出盾片、胚芽鞘环和芽尖分生组织，并且该盾片、胚芽鞘环和芽尖分生组织均能独立用于转化。

2.根据权利要求1所述的玉米外植体，其中该玉米种子选自近交细胞系或杂交细胞系。

3.根据权利要求1所述的玉米外植体，其中在将玉米种子纵切成两半前，先让玉米种子在含有LS基本盐和2，4-D的切前愈伤组织启动培养基或含有MS基本盐和2，4-D的切前芽启动培养基上萌发。

4.一种用目的基因体外转化玉米的方法，该方法包括将玉米种子纵向切成两半得到玉米种子切块外植体，其中，切开后的种子暴露出盾片、胚芽鞘环和芽尖分生组织，并且该盾片、胚芽鞘环和芽尖分生组织均能独立用于目的基因的遗传转化，然后用目的基因转化该盾片、胚芽鞘环或芽尖分生组织。

5.根据权利要求4所述的方法，其中该目的基因具有选自抗寒、抗旱、抗除草剂、抗真菌、抗虫和枯萎延迟的所需特性。

6.根据权利要求5所述的方法，其中该所需特性是抗寒。

7.根据权利要求5所述的方法，其中该目的基因编码CBF。

8.根据权利要求4所述的方法，其中该转化按照选自电穿孔、粒子轰击、须介导转化和农杆菌介导转化的方法进行。

9.根据权利要求4所述的方法，其中在切开玉米种子前，先让玉米种子在含有LS基本盐和2，4-D的切前愈伤组织启动培养基或含有MS基本盐和2，4-D的切前芽启动培养基上萌发。

10.一种离体生出至少一个玉米芽的方法，该方法包括：

a)让种子在含有LS基本盐和2，4-D的切前愈伤组织启动培养基上萌发；

b)将萌发后的玉米种子纵向切成两半得到玉米种子切块外植体；

c)将种子切块外植体置于含LS基本盐、B₅维生素和2，4-D的种子切块愈伤组织诱导培养基上温育以形成初期愈伤组织；

d)将初期愈伤组织置于含LS基本盐、B₅维生素和2，4-D的初期愈伤组织保持培养基上温育以形成可增殖愈伤组织；

e)将可增殖愈伤组织置于含LS基本盐、B₅维生素、2，4-D和BAP的胚性愈伤组织诱导培养基上温育以形成胚性愈伤组织；

f)将胚性愈伤组织置于含MS基本盐和BAP的愈伤组织/体细胞胚芽诱导培养基上温育以生出至少一个芽。

11.一种离体生出玉米芽的方法，该方法包括：

a)让种子在含有MS基本盐和2，4-D的切前芽启动培养基上萌发；

b)将萌发后的玉米种子纵向切成两半得到玉米种子切块外植体；

c)将种子切块外植体置于含MS基本盐和BAP的种子切块外植体芽诱导培养基上温育以生出至少一个玉米芽。

12.根据权利要求11所述的方法，其中种子切块外植体芽诱导培养基进一步包括6-糠氨基嘌呤。

13.一种离体培育出玉米生根幼苗的方法，该方法包括：

a)将权利要求10、11或12中生出的至少一个玉米芽置于含MS基本盐和B₅维生素的芽伸长培养基上，让至少一个玉米芽伸长；并且

b)将伸长芽置于含MS基本盐和1-萘乙酸的生根培养基上生根以形成生根幼苗。

14.一种在玉米种子被切成两半得到种子切块外植体前使玉米种子萌发的切前愈伤组织启动培养基，该培养基包括LS基本盐和一种植物生长素或植物生长素混合物，其中该植物生长素或其混合物的浓度为1.5-3.5mg/l，让上述玉米种子在上述培养基上萌发，与未在切前愈伤组织启动培养基上萌发相比，其种子切块外植体的愈伤组织诱导率增加。

15.根据权利要求14所述的切前愈伤组织启动培养基，其中植物生长素是2，4-D，浓度为3.0mg/l。