[发明专利]紫杉醇隐形脂质体

说明书

紫杉醇(paclitaxel，商品名Tacxol)是来源于红豆杉植物树皮或化学合成的一种广谱抗癌新药。由于紫杉醇不溶于水，现行制剂配方中是以无水乙醇和聚氧乙烯蓖麻油作为助溶载体，后者可以引起组织胺释放，导致严重的过敏反应，因而限制了该制剂的临床应用。

脂质体(liposome)是一种新的药物释放系统。传统脂质体由于粒径较大(在1μm以上)、包封率低、稳定性差、易渗漏、融合，特别是容易被网状内皮系统(RES)的吞噬细胞将其从血液循环中清除，从而减少了到达肿瘤组织部位的药量。1998年起，美国FDA相继批准了4个脂质体制剂上市，这些脂质体的粒径小于100nm(也称为″脂质纳米粒″)，包封率达到90％以上，提高了稳定性，不发生融合和渗漏。由于它的粒径很小，在体内可以躲过网状内皮系统的捕获，因而被称为″隐形脂质体″(stealthliposomes)。本项目标的为紫杉醇隐形脂质体，是一种新型的缓释、靶向制剂。紫杉醇是目前世界上公认的疗效最好的一种抗癌药物，具有广泛的临床应用前景。开发紫杉醇的新缓释靶向制剂是紫杉醇广泛应用的关键，它必将取代现行的制剂。

创新性及特征  我们采用两亲性聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)修饰脂质体膜，使包封抗癌药物紫杉醇的隐形脂质体的粒径小于100nm，包封率≥98％。PEG-DSPE是隐形脂质体膜材的关键成分，由于PEG-DSPE含有亲水基团，可使脂质体表面高度修饰，交错重叠覆盖于脂质体表面，形成致密的构象云。这种立体位阻保护脂质体不被血液中的调理素识别、摄取，从而降低了与MPS的亲和力，使脂质体的清除速度减慢。在血液中的驻留时间明显延长，有利于肿瘤组织及病理部位的吸收。另外，脂质体膜材中引入聚乙二醇衍生物可使脂质体的粒径做到小于100nm，使之成为脂质纳米粒，并大大加强了脂质体的稳定性。动物试验结果表明，iv24h后，紫杉醇隐形脂质体在血液中驻留35％以上，在肝脾网状内皮系统中摄取不足10％。证明紫杉醇隐形脂质体延长了在血液循环中的时间(缓释)并减少了网状内皮系统的吞噬，血液AUC隐形脂质体约为传统脂质体的2倍。紫杉醇隐形脂质体抗肿瘤作用的研究，与目前临床使用的泰素或紫素相比较，表明紫杉醇隐形脂质体比泰素或紫杉醇传统脂质体抑瘤作用提高了2倍，生存率提高了1倍。

实施例

1、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)的合成

聚乙二醇-2000溶于干燥的苯，加入1，1’-羰基二咪唑，使终摩尔比为1∶1.1，通氮密封加热至75℃，至少16h。静置冷却至室温，直到产生的聚乙二醇-羰基咪唑衍生物溶液变清，真空干燥。将二硬脂酰磷脂酰乙醇胺溶于氯仿，加入聚乙二醇羰基咪唑衍生物，使摩尔比为1∶2，蒸出氯仿，加入溶于苯的三乙胺，使三乙胺与二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的摩尔比1∶1。密封加热95℃，6h。冷却至室温，真空干燥。溶于乙醇-水(4∶1)，上硅胶-60色谱柱纯化，得到PEG-DSPE。

2、紫杉醇隐形脂质体的制备

将PEG-DSPE，氢化大豆磷脂，胆固醇，α-生育酚和紫杉醇以15∶185∶100∶1.85∶5.2摩尔比精确称重后溶于氯仿，置梨形瓶内，在氮气流下旋转蒸发，减压出去溶媒。真空干燥2～3d，得恒重薄膜。加0.02mol·L^-1Tris-HCL缓冲液(PH7.0，含0.15mol·L^-1NaCl)，旋转摇动梨形瓶，得到脂质体悬液。用氮气冲洗后，封口室温下平衡1d，探针超声处理15min，然后在500kPa操作压力下通过微流态化器混合室，经60～80冲程的微流态化处理，使脂质体粒径逐渐减小。最后对5.4％葡萄糖溶液透析除盐，得紫杉醇隐形脂质体。再经冷冻干燥制成冻干制剂。

3、粒径和包封率测定

粒径及分布测定取脂质体样品适量，用20mmol·L^-1磷酸盐缓冲液(PH7.0)稀释至脂质体浓度为0.1mg·mL^-1，进样量1.0mL，用粒径测定仪经乱反射测定脂质体粒径及分布。